【摘 要】
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目的:（1）BET（Bromo and extra-C terminal domain）蛋白与乙酰化的组蛋白结合,调节关键癌基因和抗凋亡蛋白的表达,靶向抑制BET具有抗肿瘤意义。但是结直肠癌（CRC）对BET抑制剂（BET inhibitor,BETi）存在耐药现象,本研究拟针对耐药通路,进一步寻找通过协同效应增强BETi疗效的药物联用方案并阐明分子机制。（2）蛋白酶体抑制剂硼替佐米在多种实体肿瘤
【基金项目】
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国家自然科学基金面上项目（项目编号:81372636,81302089）；
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目的:（1）BET（Bromo and extra-C terminal domain）蛋白与乙酰化的组蛋白结合,调节关键癌基因和抗凋亡蛋白的表达,靶向抑制BET具有抗肿瘤意义。但是结直肠癌（CRC）对BET抑制剂（BET inhibitor,BETi）存在耐药现象,本研究拟针对耐药通路,进一步寻找通过协同效应增强BETi疗效的药物联用方案并阐明分子机制。（2）蛋白酶体抑制剂硼替佐米在多种实体肿瘤中疗效并不显著。本课题将阐明硼替佐米的耐药机制,并提出增强该药物治疗CRC疗效的药物联用方案。方法:（1）在不同CRC细胞系中检测BETi对增殖、血管形成、c-myc基因表达改变。在BETi耐药细胞系中进行联合用药筛选,发现与硼替佐米联用产生明显药物协同效应。通过RNAseq检测联合用药的转录调控,阐明协同效应的分子机制。（2）观察硼替佐米及CRM1抑制剂KPT330处理后泛素化蛋白及p53蛋白的细胞核定位调控。评估两种药物是否能通过协同效应产生抗肿瘤作用。探究p53蛋白在药物协同效应中的作用及其分子机制。结果:（1）在BETi敏感细胞系中,JQ1抑制细胞周期、促进凋亡、抑制血管形成。但是部分CRC细胞系对BETi高度耐药,BETi单药无法有效抑制c-myc从而产生耐药性,联合硼替佐米治疗可协同抑制c-myc通路,通过下游靶基因GADD45介导细胞周期阻滞及凋亡增加。（2）硼替佐米促进泛素化蛋白出核,KPT330可抑制细胞出核现象,同时显著增强硼替佐米疗效,通过药物协同效应显著杀伤p53野生型CRC细胞系,但对于p53突变细胞系协同效应不明显。KPT330可明显抑制由硼替佐米诱导的p53蛋白出核,促进p53及其靶基因在细胞核内表达,增强p53的肿瘤抑制功能。敲除p53基因后协同治疗效应消失。结论:（1）BETi联合硼替佐米阻断NF-κB通路可通过抑制c-myc并上调下游的GADD45基因产生药物协同作用,从而增强BETi对CRC的治疗效果。（2）硼替佐米促进泛素化蛋白出核转运,其中包括p53,提示细胞对蛋白酶体抑制剂产生自我保护机制。KPT330阻止泛素化蛋白发生出核转运,增强了蛋白酶体抑制剂对结直肠癌的抗肿瘤作用。P53的核定位以及表达水平升高介导药物协同效应,硼替佐米+CRM1抑制剂联合用药对于p53野生型患者具有较好的治疗效果。
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