【摘 要】
：
几丁质来源多样,尤其在虾,蟹和昆虫的外壳中有较高的含量。几丁质具有高度有序的晶体结构,使其不溶于水和大部分有机溶剂,且工业利用率低。几丁质脱去55%以上的乙酰基获得壳聚糖,由于壳聚糖具有吸附性和安全性,因而被广泛地应用于食品,农业和医药等领域。几丁质脱乙酰酶（Chitin deacetylase,CDA,E.C.3.5.1.41）可高效催化几丁质,催化过程安全环保,可制备高品质的壳聚糖。然而目前报
论文部分内容阅读
几丁质来源多样,尤其在虾,蟹和昆虫的外壳中有较高的含量。几丁质具有高度有序的晶体结构,使其不溶于水和大部分有机溶剂,且工业利用率低。几丁质脱去55%以上的乙酰基获得壳聚糖,由于壳聚糖具有吸附性和安全性,因而被广泛地应用于食品,农业和医药等领域。几丁质脱乙酰酶（Chitin deacetylase,CDA,E.C.3.5.1.41）可高效催化几丁质,催化过程安全环保,可制备高品质的壳聚糖。然而目前报道的CDA存在活力低和产物不纯等弊端,不利于CDA的规模化生产。申氏不动杆菌MCDA01（Acinetobacter schindleri MCDA01,As CDA01）活力为201.37U/m L,在已报道的CDA中具有最高活力,且对结晶度高的几丁质具有脱乙酰特性。本研究从基因组序列和生物信息学方面对As CDA01基因组进行全面分析,并从GO,COG,KEGG基因功能注释和碳水化合物活性酶注释方面,发掘As CDA01基因。诱导表达重组菌As CDA01,并研究重组酶As CDA01的酶学性质。利用海藻酸钠包埋法对As CDA01进行固定化和应用研究。研究结果如下:As CDA01基因组全长为3.33Mb,GC含量占比43%,编码了3107个基因,包括21个r RNA基因,88个t RNA基因和9个s RNA基因。As CDA01注释到6690个GO基因,2267个COG基因,1881个KEGG基因和35个CAZy基因。As CDA01基因有975个碱基对,编码324个氨基酸。通过系统发育分析,发现As CDA01是ura D＿N-term-dom家族成员,与荧光假单胞菌多糖脱乙酰酶（Pseudomonas fluorescens polysaccharide deacetylase,Pf CDA）有55.14%的序列相似度。利用SDS-PAGE对表达在大肠杆菌BL21中的重组载体p ET-28a-As CDA01进行蛋白分子质量的检测,约为37.5k Da,与目标蛋白的分子质量一致。利用AKTA-purifier蛋白纯化系统分离纯化As CDA01,并用超微量核酸蛋白测定仪检测As CDA01的蛋白浓度,为2.11mg/m L。As CDA01的酶学性质结果显示,最佳催化温度为30℃;在25-40℃,As CDA01的相对酶活力均超过85%;最佳反应p H为7.0;在p H7.0-8.0,As CDA01保持85%以上的相对酶活。Mg2+,Ag+,Mn2+,Ni2+,Li2+,Cu2+和EDTA可提高As CDA01的催化活性,尤其Mg2+和Ni2+具有显著的激活作用,而Co2+,Cd2+和SDS会显著抑制As CDA01活性。采用红外光谱仪和扫描电镜测定样品的脱乙酰度,发现As CDA01酶解产物的脱乙酰度显著增加,比α-几丁质的脱乙酰度多63.05%。通过分析As CDA01对α-几丁质粉末,5%胶体几丁质溶液和β-几丁质粉末的脱乙酰特性,发现As CDA01对α-几丁质粉末和5%胶体几丁质溶液有显著的脱乙酰特性,且α-几丁质的脱乙酰度提高了6倍。对固定化酶As CDA01活力有显著影响的三个固定条件进行了响应面试验设计,确定了制备固定化酶的最优固定条件:2.09mg/m L海藻酸钠,3.18mg/m LCa Cl2,2.16h硬化时间,0.025%GA和30min交联时间,酶活力为301.2U/m L。对固定化酶的酶学性质进行了研究,结果表明在25-35℃,固定化酶的相对酶活均超过95%;在p H5.0-9.0,固定化酶都保持70%以上的相对酶活。经过7次重复操作固定化酶后,其相对酶活力仍超过65%。该论文有34幅图片,17个表格,126篇参考文献。
其他文献
由于水产养殖业不断发展,养殖规模业逐渐增大。水产病害也接踵而至,导致世界各地养殖户严重的经济损失,限制了水产养殖业的可持续发展。细菌是海水养殖产业中最严重的病原之一。据近年来流行病学研究表明,哈维氏弧菌（Vibrio harveyi）、副溶血弧菌（Vibrio parahaemolyticus）、大菱鲆弧菌（Vibrio scophthalmi）、鳗弧菌（Vibrio anguillarum）和美
为建立一套系统的斑点叉尾鮰伪雌鱼培育技术,本实验首先为建立一种准确和快速的斑点叉尾鮰遗传性别鉴定方法,其次研究不同浓度17β-雌二醇（17β-estradiol,17β-E2）和温度处理下对斑点叉尾鮰开口仔鱼连续饲喂27 d进行雌性性别诱导,探究斑点叉尾鮰XY雄鱼雌性化的合适17β-E2剂量和养殖温度。最后,为进一步探究温度诱导斑点叉尾鮰雌性化的性别控制机制,根据全基因组甲基化测序和转录组测序的方
由于紫菜的加工一直处于干货和烘焙阶段,缺乏深加工的品种,使得高产量的紫菜无法获得较好的经济收益。且国内对紫菜的研究主要集中在酶解法、氨基酸水解和功能成分等方面。若将其发酵加工成酱汁,不仅能提高其营养价值,还能提高其口味、香味、丰富其产品形态,使其具有良好的经济效益和市场前景。此外,紫菜在生产加工过程中经过切片工序,会产生大量的下脚料,会造成大面积的浪费。食品在加工时仍以传统的热杀菌方式为主也会导致
水产养殖的发展导致高密度、集约化和系统的循环利用,出现了疾病频繁爆发、有机污染、抗生素过度使用等问题。提高海洋生物的自身免疫力、维持可持续的海洋生态环境是一项重要任务。乳酸菌是一种重要的益生菌,可以平衡肠道菌群、维护肠道健康,促进动物生长。动物对病原体的抵抗力。因此,利用益生菌调节肠道微生物菌群,可以增加海洋动物的抗病能力,促进水产养殖的健康发展。本研究通过MRS培养基,从大菱鲆（Scophtha
脊尾白虾（Exopalaemon carinicauda）一年多次抱卵,但存在个体发育成熟度参差不齐、性腺发育不同步的问题,因此尚未建立规模化苗种繁育技术。基于此,本研究试图通过人为促熟性腺的方式使得脊尾白虾的性腺同步发育,以减少人力与财力的消耗,在结合了大量同类型的研究后,本研究选择了天然藻粉裂壶藻（Schizochytrium）、紫球藻（Porphyridium cruentum）以及神经递质
氟苯尼考（Florfenicol,FLR）是水产养殖中最常用的抗生素之一,是氯霉素的含氟抗菌类似物。据监测,FLR在中国沿海水域中的含量可达42 ng·L-1。在水产养殖过程中,FLR因其抗菌谱广、价格低廉等优势,在我国水产动物疾病控制中得到了广泛应用。然而,随着FLR在水产养殖的不合理使用及滥用,以及对FLR安全剂量范围和休药期缺乏了解,使FLR残留在水产动物体内或养殖水环境中,对人类健康和水中
三疣梭子蟹（Portunus trituberculatus）广泛分布于韩国、日本、中国和东南亚沿海,是我国重要的海产经济蟹类。micro RNA（mi RNA）是一类具有重要功能的非编码RNA,能够与靶基因m RNA的3’非翻译区（UTR）互补结合,降解其m RNA或抑制其翻译。已有研究表明,mi RNA在甲壳动物卵巢发育和成熟中发挥至关重要的作用。目前,有关mi RNA对三疣梭子蟹卵巢发育调控
据资料统计,我国水产品总产量自2015年以来不断增长,截止至2020年,水产品总量增长至6549.02万吨,其中海水水产品总量3234.64万吨,淡水水产品总量3314.38万吨,养殖水产品总量占比也持续稳定增长,至2020年达79.8%,水产品总量的不断增加反映了国民对水产品的需求也在持续增长,大众饮食结构也在逐渐发生改变,膳食水平进一步提高。人们对于水产品的消费需求结构由四大家鱼等经济型淡水鱼
皱纹盘鲍（Haliotis discus hannai Ino）为我国重要的渔业资源和养殖贝类。自上世纪70年代开始,我国皱纹盘鲍野生资源量快速下降、濒临枯竭,随着人工繁育技术的突破,我国皱纹盘鲍底播增养殖在90年代起得到快速发展,但底播初期高死亡率问题长期得不到解决。本研究在皱纹盘鲍底播海区资源调查基础上,探讨了底播后皱纹盘鲍密度与藻类、敌害生物丰度的关系;系统评估了两种标记方法对皱纹盘鲍生理和
我国是水产养殖大国,渔业经济在整个国民经济中的比重逐年提高。随着渔业养殖规模的不断扩大,水产病害的发生机率也日益增加。目前行业防治水产病害的主要方式还是在饲料中添加抗生素类药物为主,不仅对环境造成一定程度的污染,也导致抗生素在鱼类体内的富积,对处于食物链顶端的消费者的健康构成威胁。因此,如何更合理有效的防治水产病害以及采取何种绿色无污染的途径是当下水产养殖业面临的首要问题。乳酸菌作为一类公认的益生