论文部分内容阅读
目的:通过建立自发性蛛网膜下腔出血(subaranoid hemorrahage,SAH)大鼠模型,观察SAH后早期脑损伤(early brain injury,EBI)的发生发展情况及TLR4信号通路中相关炎性因子(MyD88、TRIF、IL-6、IL-1β、TNF-α)的表达情况,通过给予TAK-242和安慰剂两项对比干预手段,探讨TAK-242在SAH后的EBI过程中,对炎症反应的抑制机制和对神经损伤的保护作用。方法:将70只Sprague-Dawley大鼠(SD大鼠)随机分为正常对照组(n=10 只)、SAH 24h组(n=10 只)、SAH 72h组(n=10 只)、SAH+TAK-24224h 组(n=10 只)、SAH+TAK-242 72h 组(n=10 只)、SAH+vehicle 24h组(n=10只)、SAH+vehicle 72h组(n=10只),共7组。正常对照组不做任何处理,其余组均通过视交叉前池注血法行SAH建模,建模后分别给予TAK-242或vehicle安慰剂处理,SAH 24h和SAH 72h组不做任何治疗。于相应时间点(24h或72h)处死大鼠后,取大鼠脑组织、血清标本,分别用Western blot检测脑组织中Myd88蛋白含量、RT-PCR测定脑组织中TRIF表达情况、ELISA测定血清IL-6、IL-1β、TNF-α含量、Tunel凋亡染色观察神经元凋亡情况、Nissl染色(甲苯胺蓝染色)观察神经元存活情况。统计结果用IBM SPSS Statistics 26软件录入行数据分析。结果:1.与正常对照大鼠组(1.20±0.42)相比,SAH24h组(12.90±1.79)及 SAH 72h 组(8.70±0.95)mNSS 评分较高(P<0.01);发生 SAH 后 24h,与 SAH+TAK-242 24h 组(9.50±0.85)相比,SAH 24h 组及 SAH+vehicle 24h组(13.50±1.58)mNSS 评分较高(P<0.01);发生 SAH 后 72h,与SAH+TAK-242 72h 组(6.70±0.95)相比,SAH72h 组及 SAH+vehicle 72h组(9.33±0.95)大鼠mNSS评分较高(P<0.01)。TAK-242可以改善SAH后大鼠的mNSS评分。2.正常对照组(0.70±0.01)大鼠脑组织MyD88少量表达,发生SAH后,大鼠脑组织MyD88表达升高,正常对照组与SAH 24h组(2.09±0.04,P<0.01)及 SAH 72h 组(1.43±0.11,P<0.05)相比,MyD88 表达水平较低;发生 SAH 后 24h,SAH+TAK-242 24h 组(1.65±0.26)与 SAH24h组及SAH+vehicle 24h组(2.01±0.17)相比MyD88表达水平较低(P<0.01,P<0.05);发生 SAH 后 72h,SAH+TAK-242 72h 组(1.07±0.12)与 SAH 72h 组及 SAH+vehicle 72h 组(1.45±0.29)相比 MyD88 表达水平较低(P<0.01,P<0.05)。TAK-242可以降低SAH后大鼠的MyD88表量。3.发生SAH后的大鼠脑组织TRIF表达较正常大鼠明显增高,正常对照组(1.00±0.02)与 SAH 24h 组(4.79±0.16)及 SAH 72h 组(3.56±0.28)相比,TRIF表达水平较低(P<0.01);发生SAH后24h,SAH+TAK-24224h 组(2.76±0.21)与 SAH 24h 组(P<0.05)及 SAH+vehicle 24h 组(4.70±0.23,P<0.01)相比TRIF表达水平较低;发生SAH后72h,SAH+TAK-242 72h 组(1.92±0.28)与 SAH 72h 组及 SAH+vehicle 72h 组(3.52±0.29)相比TRIF表达水平较低(P<0.01)。TAK-242可以降低SAH后大鼠的TRIF表达量。4.正常对照组(IL-1β:1.71 ± 0.05,IL-6:14.91±0.14,TNF-α:14.44±0.95)大鼠与 SAH 24h 组(IL-1β:4.54±0.03,IL-6:55.15±0.68,TNF-α:55.19±1.07)及 SAH72h 组(IL-1β:3.62±0.03,IL-6:32.04±1.85,TNF-α:28.27±0.79)大鼠相比,血清 IL-1β、IL-6、TNF-α 值均较低(P<0.01);发生 SAH 后 24h,SAH+TAK-242 24h 组(IL-1β:2.69±0.03,IL-6:27.88±0.14,TNF-α:22.76±1.01)与 SAH 24h 组及 SAH+vehicle 24h 组(IL-1β:4.57±0.01,IL-6:54.96± 1.31,TNF-α:55.87±0.72)相比,血清 IL-1β、IL-6、TNF-α 值均较低(P<0.01);发生 SAH 后 72h,SAH+TAK-242 72h 组(IL-1β:2.11±0.04,IL-6:24.29±1.26,TNF-α:18.08±0.68)与 SAH 72h 组及 SAH+vehicle 72h 组(IL-1β:3.61±0.06,IL-6:31.68± 1.14,TNF-α:27.93±0.72)相比,血清 IL-1β、IL-6、TNF-α 值均较低(P<0.01)。TAK-242可以降低SAH后大鼠血清IL-1β、IL-6、TNF-α水平。注:IL-1β、IL-6、TNF-α 单位均为 pg/ml。5.SAH后大鼠脑组织神经元的凋亡增多,神经元受损伤较正常大鼠明显,单位视野细胞凋亡率正常对照组(2.8%)与SAH24h组(16.94%)及SAH72h组(21.32%)相比,差异有统计学意义(P<0.05);发生SAH 24h 后,SAH+TAK-242 24h 组(9.67%)与 SAH24h 组及 SAH+vehicle 24h组(17.29%)相比,细胞凋亡率相对较较低(P<0.05);发生SAH 72h后,SAH+TAK-242 72h 组(1 1.1 1%)与 SAH 72h 组及 SAH+vehicle 72h组(21.75%)相比,细胞凋亡比率相对较较低(P<0.05)。TAK-242可以降低SAH后大鼠细胞凋亡水平。6.正常对照组大鼠在单位视野下可观察到较多的尼氏小体,发生SAH后单位视野的尼氏小体减少,正常对照组(49.20±1.79)与SAH 24h组(11.50±0.85)及 SAH 72h 组(5.90±0.74)相比,尼氏小体较多(P<0.01);发生SAH后24h,单位视野的尼氏小体减少,但给予TAK-242处理组尼氏小体数量减少程度更轻,SAH+TAK-242 24h组(31.10±1.79)与SAH 24h组及SAH+vehicle 24h组(10.80±0.92)相比,差异有统计学意义(P<0.01);发生SAH后72h,大鼠脑组织尼氏小体继续减少,但给予TAK-242处理组尼氏小体数量减少程度更轻,SAH+TAK-242 72h组(26.00±1.41)与SAH72h组及SAH+vehicle 72h组(4.80±1.14)相比,差异有统计学意义(P<0.01)。TAK-242可以改善SAH后大鼠神经元存活状态。结论:TAK-242通过对TLR4的抑制来降低SAH后相关炎症因子的表达,从而降低EBI的炎症效应,间接改善因EBI导致的神经损伤,最终实现在SAH早期的脑保护作用。