论文部分内容阅读
第一部分一次性和三重脑震荡鼠惊跳反射弱刺激抑制变化研究目的:运用惊跳反射弱刺激抑制(prepulse inhibition of the acoustic startleresponse,PPI)实验比较研究一次性脑震荡(pure cerebral concussion,PCC)与多重脑震荡(multiple cerebral concussion,MCC)大鼠的感觉门控变化情况,以探讨MCC的认知损伤的积累效应。方法:用金属单摆闭合性脑损伤打击装置复制大鼠PCC和MCC模型,检测脑震荡(cerebral concussion,CC)后大鼠在惊刺激诱发的惊吓反射波幅(p值)、前置刺激诱发的反射波幅(pp值)及惊跳反射弱刺激抑制PPI变化情况。结果:PCC大鼠打击24小时内p值、pp值降低(P＜0.05),至伤后16天后接近或恢复正常;MCC打击后24小时内p值、pp值降低(P＜0.05),至伤后28天仍未恢复。CC后PPI与正常对照组相比没有明显差异性(P＞0.05)。结论:1.采用金属单摆式机械打击装置能成功建立PCC和MCC大鼠模型且此模型稳定性高,重复性强。2.大鼠感觉门控在CC后受损,随着CC次数增加,损伤持续时间也增加。第二部分一次性和三重脑震荡鼠谷氨酸脱羧酶67变化研究目的:建立PCC和MCC大鼠模型,通过谷氨酸脱羧酶(glutamic aciddecarboxylase,GAD67)的变化规律,观察PCC、MCC大鼠大脑γ-氨基丁酸(Gamma-amino butyric acid,GABA)能神经元、神经纤维变化的规律。进一步探讨CC大鼠认知行为障碍的神经生物学基础。并探讨PCC和MCC是否有损伤积累效应。方法:用自制金属单摆式闭合性脑损伤打击装置复制PCC和?MCC大鼠模型96只,随机分为PCC大鼠伤后1d、2d、4d、8d、16d、24d和MCC大鼠1d、2d、4d、8d、16d、24d(n=6)十二个实验组,另设一正常对照组(n=6)。运用抗GAD67抗体进行免疫组化染色,用图像分析系统测定扣带回皮质分子层(cg11)、扣带回皮质外锥体层(cg13)、第一躯体感觉皮质分子层(S1ULp1)、第一躯体感觉皮质外锥体层(S1ULp3)、第一躯体感觉皮质内锥体层(S1ULp5)、梨状皮质(Pir)、内侧隔核(MS)、尾壳核近脑室处(CPU1)、尾壳核远离脑室处(CPU2)、伏隔核(Acb)、压部后颗粒细胞b皮质分子层(RSGb1)、压部后颗粒细胞b皮质分子层(RSGb3)、第一感觉皮质分子层(S1BF1)、第一感觉皮质分子层(S1BF3)、第一感觉皮质分子层(S1BF5)、杏仁核(Aco)、海马CA1-3、齿状回下支(DG1)、齿状回上支(DG2)、丘脑网状核(Rt)和下丘脑腹内侧核(VMH)等23个脑区GAD67阳性表达物的光密度值,并测定前额叶皮质、顶叶皮质和丘脑网状核阳性细胞数。结果:(1)GAD67阳性表达物可在鼠脑广泛的神经元内表达。GAD67阳性细胞主要分布在大脑皮质、丘脑网状结构等部位,GAD67阳性纤维在脑内分布广泛。CC后大鼠GAD67阳性表达物呈现先下降后升高的趋势。(2)PCC大鼠中隔断面GAD67光密度:cg11、cg13、S1ULp1、S1ULp3、CPU2、Acb等脑区GAD67光密度在伤后1天降低最为明显:S1ULp5、Pir、MS、CPU1等脑区GAD67光密度在伤后8天降低最为明显。(3)MCC大鼠中隔断面GAD67光密度:CPU1、CPU2、Acb等脑区GAD67光密度在伤后2d降低最为明显;cg11、cg13、S1ULp1、S1ULp3、S1ULp5、Pir、MS等脑区GAD67光密度在伤后4d降低最为明显。(4)PCC大鼠海马断面GAD67光密度:CA2、CA3、DG1、DG2等脑区GAD67光密度在伤后1d降低最为明显;cg11、cg13、S1ULp1、S1ULp3、S1ULp5、Aco、CA1、Rt等脑区GAD67光密度在伤后8天降低最为明显;VMH脑区GAD67光密度在伤后16d降低最为明显。(5)MCC大鼠海马断面GAD67光密度:Aco、CA1-3、DG1、DG2、Rt、VMH等脑区GAD67光密度在伤后4d降为最低;cg11、cg13、S1ULp1、S1ULp3、S1ULp5等脑区GAD67光密度在伤后24d降低最为明显。(6)大鼠大脑皮质GAD67阳性细胞数在脑震荡后明显减少,然后逐渐增加至伤后24d组基本正常且MCC降低比PCC降低明显。前额叶皮质(PFC)GAD67阳性细胞数:PCC组大脑皮质GAD67阳性细胞数在16d降为最低;MCC组大脑皮质GAD67阳性细胞低谷期在8d。顶叶皮质GAD67阳性细胞数:PCC组大鼠大脑皮质GAD67阳性细胞数在8d降为最低;MCC组大鼠大脑皮质GAD67阳性细胞数在4d降为最低。结论:(1)GAD67阳性细胞和阳性纤维在大鼠脑内广泛分布。GAD67阳性细胞主要分布在大脑皮质、丘脑网状结构等部位。大鼠GAD67神经元数目呈现下降趋势,且MCC比PCC要重。(2)CC后,大鼠大脑皮质、CPu、Acb、Pir、MS、CA、DG、Rt、VMH等脑区GAD67阳性表达出现不同程度的下降,PCC中隔断面以1d和8d为重,海马断面以1d和8d为重;MCC中隔断面和海马断面以伤后4d和24d为重。提示GAD67的伤后变化可能参与了CC后的认知障碍,且这种变化与PPI变化相一致。