同种器官移植已取得瞩目成绩，但供体器官的来源短缺却越来越成为限制器官移植发展的瓶颈。而异种移植成为解决这一问题的潜在途径。带有人类基因的转基因动物的培育以及建立供受体造血嵌合体而诱导免疫耐受是今后异种移植的发展方向。我们曾经通过胸腺骨髓联合移植成功地建立了大鼠→兔的异种骨髓嵌合体模型，不仅使供体细胞在受体体内达到了长期嵌合，而且发现在受体兔体内的大鼠源性细胞免疫功能正常，即在受体兔体内存在着两种正常的免疫系统。此结果令人鼓舞。但我们研究的仅是小动物模型，与临床应用相距甚远，因而实践中需要建立与人关系更近的哺乳类大动物模型以研究异种骨髓移植问题。猪目前是世界公认的最适合的异种器官供体，故本课题拟选用猪及猴作为供受体，通过异种胸腺、骨髓联合移植建立异种造血嵌合体模型进行异种移植研究。 目的： 本文准备通过猪→猴骨髓和胸腺联合移植，在受体猴体内建立猪的免疫系统，观察受体猴体内猪细胞的嵌合情况，从而诱导对供体产生免疫耐受。同时观察移植后受体的凝血机制的变化。 方法： 第 四 军 医 大 学 博 士 学 位 论 文一 1．受体猴预处理：去脾，移植前进行2—4次环磷酚胺处理并使用一定剂量的免疫抑制剂（酶酚酸酯、环抱霉素）。 2．猪胸腺、骨髓移植：骨穿针取猪骨髓。制成 2 X 10＾／ml骨髓细胞悬液，静脉输入受体猴体内，按 2～ X 10’个细胞／公斤体重。胸腺移植：将胸腺分成约 3 X 3 X 3mm”大小的组织块，菌操作，植入受体猴颈部及背部皮下（分3～4处，每处植入2～3块）。移植后使用ALG和免疫抑制剂。 3．鉴定：通过PCR方法检测受体猴外周血有核细胞DNA中的猪的特定序列和 Wentern blot方法检测受体猴外周血细胞表面猪MHC类抗原的表达。通过病理检查观察该模型的病理改变。 4通过各项血液检查，观察异种造血嵌合体模型的凝血机制的改变。 结果： 1．受体猴一周内死亡二只，余4只能长期存活。存活猴移植后有消瘦，精神差，食欲不振等GVHD的表现，外周血白细胞和肝功能的变化以及病理变化也支持，但会很快恢复。 2．PCR检查和 Westen blot检查分别证实存在供受体细胞嵌合，最长嵌合为30天。 3．异种移植后受体猴都发生了凝血机制的改变，表现为血小板下降、凝血酶原时间延长，纤维酶原、D二聚体和TAT增加。其中死亡的2只受体猴从血液学指标和病理观察都证实发生了DIC。 结论： 1．PCR检查和 Westen blot检查分别证明猪造血细胞在受体猴体内形成了嵌合，说明本研究的异种骨髓造血嵌合体的建立是成功的。 二．血液生化指标和病理观察发现此模型仅有轻度的GVHD的发生。说明此方法建立猪一猴异种造血嵌合体模型比较安全。 3．受体猴或轻或重都发生了凝血机制的紊乱，说明凝血机制紊乱甚至 ．4． 第 四 军 医 大 学 博 士 学 位 论 文一DIC是异种移植除了体液和细胞排斥外的第三个难以跨越的屏障。 4．本实验嵌合时间较短，可能主要与受体体内缺乏支持异种供体骨髓细胞和其它细胞生长发育所需的细胞因子有关。