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食管癌是目前世界范围内发病率第八,致死率第六的恶性肿瘤。根据目前的研究,食管癌发生过程受多种因素影响,包括环境因素、遗传因素、饮食习惯。同时,随着分子生物学的发展,也发现食管癌的发生过程会有多种癌症基因的激活或者抑癌基因的突变失活。食管癌目前主要的治疗方法包括手术、化疗、放疗,但是病人个体差异大,预后差,死亡率高。了解食管癌发病机制,探索新的治疗方式,寻找潜在的靶标分子,成了重要的研究方向之一。 Bcl-3是一个原癌基因,作为非典型的IκB家族成员之一,Bcl-3定位于核内,激活或者抑制NF-κB通路转录活性。目前已经在包括直肠癌、子宫内膜癌、乳腺癌等多种肿瘤中被检测到其表达较正常组织异常增高。在肿瘤的发生转移等过程中可能是通过调控细胞周期或者抑制细胞凋亡来促进肿瘤细胞发生增殖。RelB是NF-κB信号通路非经典途径重要的一员,可以沉默或者激活一些基因。目前有研究指出,RelB在多种癌症中调节抗凋亡基因,在前列腺癌、乳腺癌、结肠癌中都被检测到处于激活状态,可以在促进肿瘤的发生或者抑制肿瘤细胞的凋亡方面发挥功能。但是,目前Bcl-3和RelB在食管癌中的作用鲜有报道。本文主要采用RNA干扰技术,敲低食管癌细胞系Bcl-3和RelB的表达,从而研究Bcl-3和RelB对食管癌发生的作用。本文主要应用的方法如下: 1)利用RNA干扰技术,慢病毒包装感染食管癌细胞系EC109和KYSE510,进行基因敲低,构建稳定转染的Bcl-3和RelB敲低细胞系,并利用实时荧光定量PCR和免疫印迹(western blot)技术检测敲低效果;2)体外实验:采用细胞增殖实验,平板克隆形成实验,分别检测 Bcl-3、RelB敲低后,食管癌细胞系EC109和KYSE510体外增殖能力的变化;3)体内成瘤实验:裸鼠皮下注射 Bcl-3、RelB敲低食管癌细胞系EC109悬液,转染的tGFP细胞EC109悬液作为阴性对照,多西环素加水诱导,正常饲养3周后,剥离肿瘤,观察两组差异;4) 收集食管癌病人组织以及癌旁正常食管上皮组织样本,制作组织芯片,利用免疫组织化学染色技术检测组织中Bcl-3及p-Bcl3蛋白表达量; 实验得到了以下结果: 1)敲低Bcl-3可以抑制食管癌细胞系EC109和KYSE510的体外增殖以及EC109的体内成瘤能力;2)敲低RelB可以抑制食管癌细胞系EC109和KYSE510的体外增殖能力;3) Bcl-3和p-Bcl-3在食管癌病人组织中高表达,且与淋巴结转移和临床分期相关。 通过以上实验结果,可以得出 Bcl-3对于食管癌的发生有促进作用,而RelB可能在食管癌发生中发挥重要功能。这对于研究Bcl-3和RelB在食管癌中的功能有重要作用,同时也为其未来成为潜在的靶标治疗分子提供了依据。