β-脱卤酶的克隆表达及应用

来源 :浙江大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:linxinrudo
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
3-羟基丙酸是当今世界12种最具潜力的平台化学产品之一.通过前期的工作,本实验室从土壤中筛选得到了一株能够产生β-脱卤酶的菌株芽孢杆菌Bacillus sp. CGMCC No.4196,该菌株能够以3-氯丙酸为底物,代谢生成3-羟基丙酸。本文构建了Bacillus sp.的基因组文库,通过功能筛选得到了序列长度为465bp的β-脱卤酶基因bhd,并以pET30a(+)为载体,Escherichia coli BL21(DE3)-CondonPlus为宿主,实现了基因的表达。通过镍离子亲和纯化得到重组β-脱卤酶rBhd,大小约为23.1kDa。酶学性质研究表明,以3-氯丙酸为底物,rBhd的最适温度为30℃,最适pH为7.0,Km和Vmax分别为3.26μmol/L和17.86μmol/(mL·min)。   利用rBhd建立了以3-氯丙酸为底物,水解制备3-羟基丙酸的酶法转化路线.用rBhd制备3-羟基丙酸反应条件温和,且由于酶的专一性,使得底物转化率较高,无副产物生成。以10mmol/L3-氯丙酸为底物,反应32h,底物转化率约为93%,产物3-羟基丙酸的终浓度约为9.4mmol/L。本实验为酶法制备3-羟基丙酸奠定了基础。
其他文献
近年来,宁波市中职学校掀起一股信息化改革浪潮,各个专业的教师都在想方设法把微课融入本专业教学当中.微课教学突破了传统教育模式的时空限制,给职业教育改革带来新的挑战和
我国大多数油田开采的原油为石蜡基原油,其凝点和反常点温度较高,流变性质异常复杂。当原油温度逐渐降至凝点附近时,其流变性质表现出复杂的触变性。目前原油多采用加热工艺
急性髓系白血病(AML)是一种含有多个亚型的异质性血液恶性肿瘤.过去20多年来,有关AML的发病机制和治疗学等方面取得了很多进展.本文拟就本课题组在过氧化还原酶(peroxiredoxi
学位
层状双金属氢氧化物(Layered:Double Hydroxides,简写为LDHs),又称类水滑石化合物(Hydrotalcite like compounds,简写为HTlc),是一种典型的阴离子型层状化合物。本论文对部分典型
钢琴演奏作为一门艺术,被世人推崇和喜爱,其不仅具有钢琴专业的学术价值,而且也陶冶了人们的情操,为了将这门艺术发扬光大,很多学校设置了钢琴课,那么如何让学生掌握好钢琴演
超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN)又被称为起搏通道,该通道在动作电位形成、身体平衡的维持等生理活动中有重要作用。HCN通道在神经系统以及心脏中广泛分布,同时HCN通
急性髓细胞白血病(AML)是一种起源于造血干细胞的异质性克隆性疾病,也是一种在表型、细胞遗传学及分子异常上高度异质性的疾病.最早的分层是基于细胞遗传学将AML患者分为高危
本文对造血的发生的研究现状,骨髓、外周血以及脐带血来源造血干细胞的临床应用现状,胎盘组织源造血干细胞的鉴别、分离和生物学特性的研究进展进行了较系统的归纳介绍,重点
  本文主要介绍一辆一汽丰田卡罗拉1.6L GL AT轿车.由于氧传感器的故障,不能准确检测废气中的氧含量,氧传感器反馈错误信号给发动机控制单元,使发动机出现怠速不稳,发动机中、