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犬细小病毒(Canine parvovirus，CPV)是细小病毒科细小病毒属成员，为无囊膜、单股DNA病毒。1978年首次报道由此病毒引起的犬细小病毒病。CPV传播迅速，以高发病率和高死亡率为特征。本研究使用传统的病毒学研究方法对犬细小病毒感染疑似粪样进行了分离、鉴定。从广州及其周边地区宠物医院临床表现疑似CPV感染的病犬(临床表现体温升高、呕吐、腹泻粪便呈番茄汁样且恶臭等，且经CPV诊断试纸检测均为阳性)采集粪便，采用F-81细胞进行犬细小病毒的分离并成功获得1株CPV毒株，通过对病毒形态结构、HA、HI、理化因素敏感性试验、PCR鉴定等证实所分离病毒为CPV，命名为CPV-GZ。通过理化特性、红细胞凝集试验等，证明分离病毒具有细小病毒的系统特性；细胞培养物反复冻融、离心处理，沉淀物经负染后，在电子显微镜下观察，观察到直径约为20～22nm的病毒粒子；根据GenBank发布的犬细小病毒序列高度保守序列，设计一对特异性引物用于检测CPV，试验扩增出了与预计大小相一致的片段。对CPV阳性样品进行CPV VP2基因的扩增并进行序列测定，为下一步克隆需要，分别在上、下游引物中引入BamH I和HindⅢ酶切位点，同GenBank发布细小病毒VP2基因与GeneBank中发表的番鸭细小病毒(登录号：NC-006147)、小鹅瘟细小病毒(登录号：NC-001701)、猪细小病毒(登录号：AY68487)、貂肠炎病毒(登录号：AY68487)、人细小病毒(登录号：DQ408301)、家鼠细小病毒(登录号：NC-001630)、犬细小病毒(登录号：M38245)、猿细小病毒(登录号：U36342)、猫全白细胞减少症病毒(登录号：M38246)进行比对，进行相似性比较和系统进化树的绘制，证明该病毒与犬细小病毒的亲缘关系最近。
根据VP2基因序列测定结果，分析目前流行CPV的抗原型及CPV的基因变异情况。在病毒的VP2基因序列中都存在个别点突变，多数为同义突变。核苷酸相似性与氨基酸相似性较高，表明VP2基因变异相对较少，通过关键位点氨基酸的差异，且依据型特异性位点426位的不同，确定CPV-GZ株为CPV-2a亚型。以CPV VP2片段亚克隆至表达载体pET-32a(+)，构建表达质粒pET-32a(+)-VP2，转化表达菌BL21，并利用IPTG诱导表达，通过SDS-PAGE检测表达。
综上所述，本研究完成了犬细小病毒CPV-GZ的分离鉴定，通过对VP2基因的序列分析目前流行CPV的抗原型及CPV的基因变异情况。通过诱导条件优化，完成了CPV VP2片段的原核表达，为下一步研究打下了良好的实验基础。