【摘 要】
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五参散出自《太平圣惠方》卷六,全方有扶助正气、活血解毒之功效,其含多种活性成分。多糖是其主要活性成分之一,具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。目前,关于五参散多糖的结构解析和生物活性的研究甚少。因此本课题以五参散为研究对象,用响应面法对五参散多糖热水提取工艺进行优化,依据最优工艺制备五参散多糖和单味多糖,并对多糖的理化性质和免疫作用进行研究,主要研究结果如下:(1)五参散多糖热水提取工艺优
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五参散出自《太平圣惠方》卷六,全方有扶助正气、活血解毒之功效,其含多种活性成分。多糖是其主要活性成分之一,具有免疫调节、抗氧化、抗肿瘤等多种生物活性。目前,关于五参散多糖的结构解析和生物活性的研究甚少。因此本课题以五参散为研究对象,用响应面法对五参散多糖热水提取工艺进行优化,依据最优工艺制备五参散多糖和单味多糖,并对多糖的理化性质和免疫作用进行研究,主要研究结果如下:(1)五参散多糖热水提取工艺优化研究:通过单因素试验研究料液比、提取温度、提取时间、提取次数对五参散多糖提取率的影响,选取料液比、提取温度、提取时间为优化因素,采用三因素三水平的响应面分析法优化五参散多糖热水提取的最佳工艺条件。结果表明,五参散多糖最佳提取工艺参数为:料液比1:45(g/m L)、提取温度99.8℃、提取时间2.45 h、提取2次,在此条件下,提取率为4.10%。(2)多糖的制备和理化性质研究:依据最优工艺制备五参散多糖和单味多糖,采用苯酚-硫酸法、考马斯亮蓝法、傅里叶变换红外光谱法(Fourier Transform Infrared Spectroscopy,FT-IR)、高效液相色谱法(High Performance Liquid Chromatography,HPLC)、高效凝胶渗透色谱法(High Performance Gel Permeation Chromatography,HPGPC)测定多糖的可溶性总糖含量、蛋白质含量、特征吸收峰、单糖组成、分子量大小及分布,并利用DEAE-52纤维素层析柱对五参散多糖进行分离纯化,探究其组分。结果表明,人参多糖、北沙参多糖、太子参多糖、丹参多糖、苦参多糖、五参散多糖的提取率依次为7.71%、7.30%、4.45%、4.59%、5.57%、4.10%;可溶性总糖含量依次为63.93%、63.08%、86.40%、84.57%、89.31%、91.87%;蛋白质含量为0.55%、2.74%、0.30%、0.95%、0.13%、0.20%;FT-IR表明五参散多糖和单味多糖均具有多糖特征吸收峰,且具有α-糖苷键/β-糖苷键;HPLC结果表明,五参散多糖及单味多糖均含有葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖,但所含比例不同;HPGPC结果表明,五参散多糖和单味多糖分子量大小及分布有所不同;经DEAE-52纤维素纯化后,表明五参散多糖含有中性糖和酸性糖。(3)多糖免疫作用研究:通过考察对DPPH自由基、羟基自由基的清除能力和总抗氧化能力指数(Oxygen Radical Absorbance Capacity,ORAC)以及对RAW 264.7巨噬细胞、LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞的影响,测定多糖的免疫作用。结果表明,五参散多糖及单味多糖均能清除DPPH自由基、羟基自由基,具有一定的氧自由基吸收能力,在合适浓度范围内,均能促进RAW 264.7巨噬细胞增殖,抑制LPS诱导的RAW 264.7巨噬细胞增殖,增强巨噬细胞的免疫功能。综上所述,五参散多糖和单味多糖均含有少量的蛋白质,且含有α-糖苷键/β-糖苷键,其单糖成分为葡萄糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖。对五参散多糖进步一纯化表明其主要是中性糖和酸性糖。五参散多糖和单味多糖均具有一定的清除自由基和免疫作用,可作为一种潜在的免疫调节剂,这为五参散多糖以后的开发和应用提供了一定的数据支撑。
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