四川部分地区副猪嗜血杆菌的分离鉴定

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副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis, HPs)是革拉瑟氏病的病原菌,主要引起猪的多发性浆膜炎与关节炎,能够导致保育仔猪发生严重的疾病,造成较大的经济损失。本研究从四川8个地区共13个县区采集55份副猪嗜血杆菌病疑似病料,进行副猪嗜血杆菌的分离鉴定和部分生物学特性等方面的研究。主要研究结果如下:1.四川地区副猪嗜血杆菌的分离与鉴定本研究在2013年6月到11月期间,从四川8个地区共13个县区采集55份副猪嗜血杆菌病疑似病料,经过细菌革兰氏染色观察、生化鉴定、PCR鉴定,成功分离出14株副猪嗜血杆菌(包括:南充6株、广安4株、雅安2株、乐山2株);分离株经革兰氏染色,在油镜下都呈现出多样的形态;14株分离株表现出一致的生化特性,不溶血且都依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD);采用琼脂扩散试验对分离的14株野毒株进行血清型分型鉴定,鉴定出其中3株为血清5型,1株为血清13型,其余10株不确定;本研究对分离的菌株进行药物敏感性试验,发现14株HPs对氟苯尼考、强力霉素敏感性高。2.副猪嗜血杆菌的部分生物学特性研究本研究对分离菌株用的培养基进行了培养基筛选和优化,发现TSA固体培养基最适合HPs的生长,接种后20小时左右HPs就能够长出;本研究分别对NAD浓度、小牛血清浓度对HPs生长效果的影响进行了优化比较,结果表明TSB肉汤中添加10μg/ml的NAD、6%小牛血清最适合HPs的生长;测定细菌生长曲线和活菌计数发现,将HPs接种到TSB肉汤中培养12小时,肉汤中的活菌数最多;本研究对相同血清型不同分离株进行了毒力比较,通过感染小白鼠测定半数致死量,发现同一猪场分离出的毒株毒力基本没有差异,分离自不同地区的菌株其毒力有一定的差异,但差异不大。
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