猪流行性腹泻(Porcine epidemic diarrhea, PED)是由猪流行性腹泻病毒(Porcine epidemic diarrhea virus, PEDV)引起的一种急性肠道传染病。对猪群尤其是仔猪的危害极其严重，能够导致仔猪的腹泻、脱水甚至死亡。2010年以来，由PEDV变异株引起的以高发病率、高死亡率为特征的PED在我国暴发流行，造成了大批仔猪发病和死亡，给我国养猪业造成了极大经济损失。
　　本研究利用Vero细胞从山东莒县发病猪场送检病料中分离获得1株PEDV，采用RT-PCR检测、细胞病变分析、细胞超薄切片观察、组织病理切片观察、间接免疫荧光试验、S基因序列测序分析等技术手段对分离毒株进行了鉴定，确定其为PEDV变异毒株，命名为JX16株。该毒株与2012年从安徽省分离到的变异流行毒株(AH2012株)的核苷酸序列同源性高达99.2%；与泰国分离到的EAS1序列同源性较低，同源性为93.2%；与经典毒株CV777的序列同源性为94.1%。由该毒株与其他有代表性毒株S基因绘制的遗传进化树可以看出，该毒株与CV777、DR13等经典毒株的亲缘关系较远，而与当前国内流行的变异毒株较为相近，可用作变异毒株分析的代表毒株。
　　将JX16株在Vero细胞上连续传代至100代，传代过程中对病毒滴度变化、毒力变化、序列变化进行分析。结果发现，随着病毒代次的升高，病毒滴度不断提高，100代时已高达107.5TCID50/mL；病毒的毒力逐渐降低，40代时病毒对仔猪已无致病性。传代至61代时病毒S基因序列发生了改变，S基因4085-4099位置出现了15个连续的核苷酸缺失。在传代过程中由于病毒逐渐适应Vero细胞培养，尽管接毒剂量不断降低，但接毒后出现细胞病变的时间仍不断缩短。
　　为了对PEDV进行准确定量，本研究针对PEDVN蛋白基因设计了1对特异性引物，通过摸索反应条件、构建标准品质粒、绘制标准曲线成功建立了一种针对PEDV的荧光定量PCR方法。该方法具有良好的灵敏性、特异性和重复性，最低检测限可达10copies/μL，为PEDV的快速检测和定量分析提供了技术手段。
　　为了探究miRNA对PEDV增殖的影响，本研究首先利用分子生物学软件对PEDV的靶序列进行筛选和保守性分析，选定16个靶位点序列对应的miRNA，进行体外试验探索其对PEDV在Vero细胞中增殖过程的影响。结果发现miR-556-3p、miR-888-3p能够显著降低病毒滴度及拷贝数，miR-19b-1-5p、miR-429、miR-891b能够显著提高病毒滴度及拷贝数。
　　本研究分离鉴定了1株PEDV变异毒株，将其在Vero细胞上传代致弱并对其生物学特征进行了探究，建立了1种针对PEDV的荧光定量PCR方法，筛选出2种抑制PEDV增殖的miRNA和3种促进PEDV增殖的miRNA。本研究为变异流行毒株引起的PED防控制剂的研发提供了思路和基础。