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哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)是海水鱼类和无脊椎动物的最常见的病原菌之一,常引起鱼类疾病的发生,对海水养殖业造成了巨大的经济损失。最新研究表明,Ⅵ型分泌系统(T6SS)在哈维氏弧菌的群体感应系统、生物膜形成、鞭毛合成和细胞毒力等致病相关功能中可能发挥了重要作用。TssJ是T6SS核心亚基之一,通过N末端酰基化的半胱氨酸残基锚定在外膜上的外膜脂蛋白。本论文利用哈维氏弧菌tssJ基因构建了候选哈维氏弧菌的亚单位疫苗,DNA疫苗和以益生菌传递重组DNA疫苗,分析这三种疫苗对实验动物斜带石斑鱼(Epinephelus coioides)的免疫保护作用。本研究以哈维氏弧菌GDH11385基因组DNA为模板,扩增获得了tssJ基因,构建候选亚单位疫苗rTssJ,DNA疫苗pCTssJ,益生菌传递的重组DNA疫苗pCTssJ/F3。结果表明,以斜带石斑鱼为动物模型,免疫4周后,致病菌哈维氏弧菌进行攻毒实验,亚单位疫苗rTssJ,DNA疫苗pCTssJ,益生菌传递的重组DNA疫苗pCTssJ/F3,其相对免疫保护率分别为45%,60%,49.86%。血清免疫指标,酸性磷酸酶(ACP)活力结果表明,在免疫1周后,免疫rTssJ组和免疫pCTssJ组均与其PBS对照组有显著提高(p<0.05),而免疫pCTssJ/F3组则在免疫3周后与PBS对照组有显著提高(p<0.05);碱性磷酸酶(AKP)活力结果表明,在免疫1周后,免疫pCTssJ组与PBS对照组有显著提高(p<0.05),而免疫rTssJ组和免疫pCTssJ/F3在免疫2周与对照组PBS有显著提高,其中rTssJ组在免疫2和3周后均与免疫1周后有显著提高,且其活力在3周达最大值;超氧化物歧化酶(SOD)活力结果表明,在免疫1周后,免疫rTssJ组和pCTssJ组与对照组PBS有显著提高(p<0.05),而免疫pCTssJ/F3组则在免疫3周后与PBS对照组有显著提高(p<0.05)。综上所述,tssJ基因无论是作为亚单位疫苗、DNA疫苗还是益生菌传递DNA疫苗,都具有一定的免疫保护效率,本研究为下一步深入研制具有高保护率的哈维氏弧菌候选疫苗奠定基础。