【摘 要】
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本试验通过浸种催芽法研究了浸种温度、浸种时间、赤霉素浓度、赤霉素处理时间、催芽温度五种因素对于三色堇21号、大花三色堇9号及21×9三个三色堇品系种子发芽率的影响;通过浸种转化法设计了三个单因素试验,研究了不同负压处理、种子浸种形态、浸种时间对于三色堇转化GUS基因的影响;通过在三色堇21号种子浸种催芽过程中分别逐步添加7个卡那浓度溶液进行了非转基因卡那抗性浓度的筛选;通过花粉粒携带法、切柱头滴加
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本试验通过浸种催芽法研究了浸种温度、浸种时间、赤霉素浓度、赤霉素处理时间、催芽温度五种因素对于三色堇21号、大花三色堇9号及21×9三个三色堇品系种子发芽率的影响;通过浸种转化法设计了三个单因素试验,研究了不同负压处理、种子浸种形态、浸种时间对于三色堇转化GUS基因的影响;通过在三色堇21号种子浸种催芽过程中分别逐步添加7个卡那浓度溶液进行了非转基因卡那抗性浓度的筛选;通过花粉粒携带法、切柱头滴加法两种花粉管通道法研究了GUS、TA29-Barnase、GRP-Barnase三个基因对于三色堇转化效率的影响。具体结果如下:1.三色堇21号种子萌发的最优组合为:浸种温度40℃,浸种时间24 h,赤霉素浓度80 mg/L,赤霉素浸泡时间1 h,催芽温度20℃,且浸种时间、赤霉素浓度、催芽温度、赤霉素浸泡时间对于发芽率影响呈显著性差异;大花三色堇9号种子萌发的最优组合为:浸种温度30℃,浸种时间24 h,赤霉素浓度80 mg/L,赤霉素浸泡时间2 h,催芽温度25℃,且五种因素影响均呈显著性差异;杂交种21×9号种子萌发的最优组合为:浸种温度25℃,浸种时间12 h,赤霉素浓度80 mg/L,赤霉素浸泡时间3 h,催芽温度25℃和10℃,且浸种温度、浸泡时间、赤霉素浸泡时间的影响呈显著性差异。2.不同负压处理对于出苗率具有显著性差异,负压越强,出苗率越低,但GUS染液染色率得到显著提高,负压0.07MPa下染色率达到11.91%,低负压下植株均未染色;相同负压下露白种子浸泡质粒溶液后得到3个染色株,去种皮种子的子叶未被染色;常压下质粒溶液浸泡时间越长,出苗率显著降低,在36h时有有子叶部分被染色的,染色率为1.43%,其他浸泡时间未得到染色株。3.浸种催芽后分别用0、50、100、150、200、250、300mg/L卡那霉素溶液浇种子,通过观察种子发芽及子叶变黄情况,最终选定150mg/L作为三色堇非转基因种子最佳筛选浓度。4.三色堇花粉管通道法转GUS试验中:三色堇21号采用花粉粒携带法转化0.4ug/ul浓度质粒下获得21个部分部位染色株,染色率0.75%;大花三色堇小花脸采用切柱头滴加法转化0.2ug/ul浓度质粒下获得1个全部染色株,染色率为0.15%。该试验初步说明花粉管通道法具有转化三色堇成功的可能性,但易形成嵌合体。
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