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目的:本研究从肠道机械屏障及TLR4信号通路方向,探讨植物乳杆菌（LP）、1,25（OH）2D3及二者联合对代谢相关脂肪性肝病（MAFLD）大鼠的具体作用机制。方法:40只体质量约（200±20）g的SPF级健康雄性SD大鼠随机分为5组:补充蛋氨酸胆碱（MCS）饮食组、蛋氨酸胆碱缺乏（MCD）饮食组、MCD+LP组、MCD+1,25（OH）2D3组、MCD+LP+1,25（OH）2D3组。LP每日给药量为2×10~9CFU/100g（植物乳杆菌冻干粉现用现配）,1,25（OH）2D3每日给药量为6ng/100g。连续灌胃喂养4w,留取血清、肝组织及回肠。观察大鼠一般情况,赖氏法检测血清指标ALT、AST、TC、TG、HDL-C、LDL-C,HE染色观察肝脏组织及回肠粘膜病理,ELISA法检测大鼠血清炎症因子LPS、TNF-α水平,免疫荧光法观察大鼠肠粘膜紧密连接蛋白Claudin-1和Occludin的表达和分布,Western Blot检测大鼠肝脏组织中TLR4信号通路相关蛋白TLR4、My D88、NF-κB及肠粘膜紧密连接蛋白Claudin-1、Occludin的表达。结果:1.实验第4周末,MCD组肝脏组织中HE染色出现肝细胞明显肿胀,存在数量不等且大小不一的脂肪空泡,炎症细胞浸润,细胞核居边,胞质疏松,肝细胞气球样变。采用NAFLD活动性评分（NAS）（脂肪样变、小叶内炎症、气球样变）对大鼠肝脏组织进行病理学评分,可达5分以上。结合与MCS组相比,MCD组大鼠血清ALT、AST水平升高（p＜0.001）,TC、TG、HDL-C、LDL-C水平下降（p＜0.001）,即出现了代谢功能障碍。表明大鼠MAFLD模型建成。2.MCD组大鼠行动迟缓,毛发紊乱,光泽度差,精神萎靡,体重较MCS组明显下降（p＜0.001）,肝指数较MCS组升高（p＜0.001）。经LP、1,25（OH）2D3及LP+1,25（OH）2D3干预后大鼠活动度较好,毛发较为柔顺有光泽,体重及肝指数较MCD组得到了有效改善,其中以LP+1,25（OH）2D3组改变最为明显。3.与MCD组比较,LP组、1,25（OH）2D3组及LP+1,25（OH）2D3组大鼠血清ALT、AST水平明显下降（p＜0.001）,其中以LP+1,25（OH）2D3组改变最为显著（p＜0.01）,LP组、1,25（OH）2D3组、LP+1,25（OH）2D3组大鼠血清TC、TG、HDL-C水平明显上升（p＜0.001）,LDL-C无显著变化（p＞0.05）。4.与MCS组对比,MCD组大鼠肝脏颜色明显发黄,表面可见脂质沉积,质地韧,边缘较钝。回肠粘膜组织中肠上皮结构完整性中断,上皮细胞坏死脱落,炎症细胞增多,肠腺分布稀疏,绒毛短缩,排列疏松,间隙变大。而LP组、1,25（OH）2D3组及LP+1,25（OH）2D3组大鼠肝脏颜色呈暗红色,表面相对较光滑,质地较柔软。肝脏组织中肝细胞内脂肪空泡明显减少,胞质较为均匀。回肠粘膜组织中肠上皮结构相对完整,炎症细胞明显减少,肠腺分布较为整齐。其中以联合组肝脏大体、组织及回肠粘膜病理改变最为明显。5.与MCS组比较,MCD组大鼠血清炎症因子LPS、TNF-αELISA水平升高（p＜0.001）,经LP、1,25（OH）2D3及LP+1,25（OH）2D3干预后大鼠血清炎症因子LPS、TNF-αELISA含量较MCD组显著下调（p＜0.001）,其中以LP+1,25（OH）2D3组TNF-α水平下降最为明显（p＜0.01）。6.免疫荧光显示,MCD组较MCS组细胞间隙红色荧光染色暗淡,荧光强度明显减弱,说明Claudin-1和Occludin蛋白的表达量较MCS组降低,而LP组、1,25（OH）2D3组、LP+1,25（OH）2D3组较MCD组细胞间隙红色荧光染色明亮,荧光强度明显增强,说明Claudin-1和Occludin蛋白表达量均较MCD组呈不同程度的升高,其中以LP+1,25（OH）2D3组Claudin-1和Occludin蛋白的表达升高最为显著。7.WB提示,MCD组TLR4、My D88、NF-κB的蛋白表达较MCS组明显升高（p＜0.001）。LP组、1,25（OH）2D3组及LP+1,25（OH）2D3组较MCD组可显著下调TLR4、My D88、NF-κB的蛋白表达（p＜0.001）,其中以联合组下降最为明显（p＜0.01）。MCD组Claudin-1和Occludin紧密连接蛋白的表达量较MCS组呈现明显降低（p＜0.001）,而经LP、1,25（OH）2D3、LP+1,25（OH）2D3干预后Claudin-1和Occludin蛋白的表达量较MCD组明显升高（p＜0.001）,其中以联合组升高最为显著（p＜0.01）。结论:植物乳杆菌、1,25（OH）2D3可以减轻MAFLD大鼠的炎症浸润及脂质沉积,二者联合干预效果更加显著。可能是共同通过改善MAFLD大鼠肠粘膜紧密连接Claudin-1和Occludin蛋白的表达及分布,降低肠黏膜机械屏障的通透性,从而抑制LPS诱导的TLR4致炎信号通路（TLR4-My D88-NF-κB）,缓解MAFLD大鼠的炎症反应及脂质紊乱。