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第一章香烟提取物刺激对食管鳞状上皮细胞miRNA的影响研究目的：筛选与香烟烟雾刺激密切相关的食管鳞癌miRNA表达谱,为食管鳞癌发生发展的机制研究提供新的力‘向。方法：使用高通量miRNA芯片方法筛选经过香烟提取物刺激后的食管鳞状上皮细胞miRNA表达谱,结合相关研究文献,确定与吸烟密切相关的食管鳞癌miRNA表达谱。结果：从检测的1223种人类miRNA确定总共有60种miRNA的表达发生明显改变,其中13种显著上调,47种显著下调。结合相关文献发现,香烟烟雾中的致癌物质可能通过刺激以下miRNA及其uJ能机制导致食管鳞癌的发生和发展：miR-101-3p表达下调反向调节COX-2的表达,miR-122-3p、miR-23b-3p异常表达参与p53的调控；而miR-708-5p、miR-24-1-5p、miR-140-3p、miR-210的表达异常则分别靶向调控ZEB2、AURKB、PDGFRα、FGFRL1基因。并且,首次在食管鳞癌的研究中发现miR-101-3p、miR-122-3p、miR-23b-3p、 miR-708-5p、miR-24-1-5p、miR-140-3p的异常表达。结论：本实验通过miRNA芯片检测香烟提取物刺激的食管鳞状上皮细胞,发现60种异常表达miRNA,这些异常表达的miRNA可能参与吸烟相关食管疾病的发生。第二章miR-101-3p参与食管鳞癌发生机制的初步研究目的：研究miR-101-3p参与食管鳞癌发生发展可能的作用机制,明确miR-101-3p可能的靶基因以及相互作用机制。方法：1、运用real time PCR法定量分析miR-101-3p在人食管鳞癌组织样本中的表达情况,进一步验证第一章miRNA芯片结果；2、采用Western Blot法检测人食管鳞癌中COX-2蛋白的表达情况；3、运用miR-101-3p载体构建、慢病毒包装及细胞转染的方法使得食管鳞状上皮细胞以及食管鳞癌细胞过表达miR-101-3p,并用香烟提取物CSE刺激、特异性COX-2抑制剂NS-398干预进行对比研究,通过Western Blot印迹、MTT法、流式细胞检测、Transwell小室等方法研究细胞内miR-101-3p、COX-2及CSE刺激之间的相互关系。结果：人食管鳞癌组织样本中的miR-101-3p表达明显低于相应的癌旁组织,而COX-2蛋白的表达则明显高于癌旁组织；体外细胞学实验结果提示用CSE刺激食管鳞状上皮细胞后miR-101-3p表达下调,而COX-2表达明显增加。进一步研究表明上调miR-101-3p能抑制COX-2的表达；而食管鳞癌细胞中上调miR-101-3p后发现COX-2的表达受到抑制。实验还同时证实了低表达miR-101-3p和高表达的COX-2能抑制肿瘤细胞凋亡、刺激肿瘤细胞生长,导致癌症的发生。同时,还发现miR-101-3p有抑制食管鳞癌细胞G1期进展能力和抑制细胞增殖的能力。但是,发现miR-101-3p无抑制癌细胞侵袭和迁移的能力。运用特异性COX-2抑制剂NS-398干预进一步证明了miR-101-3p和COX-2有反向调控的作用。结论：香烟烟雾可能刺激miR-101-3p的表达下调,而miR-101-3p的下调可能反向调控COX-2表达,从而参与食管鳞癌的发生。但miR-101-3p可能与食管鳞癌细胞的侵袭和迁移没有明显相关性,即miR-101-3p的异常表达与食管鳞癌的浸润和转移无关。NS-398对于食管鳞癌可能有一定的治疗作用。