沙棘果渣中黄酮提取、纯化及抗氧化活性研究

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我国沙棘资源丰富,有很高的药用价值,生产果汁或榨油后的沙棘果渣富含大量黄酮类化合物,常作为废弃物丢弃。为实现资源的深度开发利用,本文以沙棘果渣为原料,从中提取黄酮类化合物,研究提取及纯化的最佳工艺,并对抗氧化活性进行评价,为开发抗氧化功能食品提供理论依据。主要研究内容如下:  通过热浸提法进行单因素及响应面优化实验确定最佳提取工艺为:乙醇浓度50%,提取温度70℃,料液比为1∶20,提取时间2h,次数3次。按此工艺提取,沙棘果渣中总黄酮含量为28.54mg/g,黄酮粗提物纯度为12.52%,提取得率为22.84%。  对大孔吸附树脂纯化沙棘果渣黄酮工艺进行优化,通过静态吸附实验,从7种大孔吸附树脂中选择出适合分离纯化的X-5树脂。通过动态吸附实验确定最佳的纯化条件为:样品浓度0.8-1.0mg/mL,流速为1.0mL/min,最大上样量为8BV。洗脱时,先用蒸馏水洗,后用3 BV50%乙醇洗,此条件下纯化后得到的沙棘果渣黄酮纯度可达41.39%;当分别用3 BV10%、30%、50%、70%的乙醇梯度洗脱时,50%乙醇洗脱部位黄酮纯度最高,可达50.93%。  HPLC法测定沙棘果渣黄酮粗提物和纯化后黄酮中芦丁、槲皮素、山奈酚和异鼠李素单体成分的含量,色谱柱为C18柱,检测波长为360nm,流动相为乙腈和0.4%的磷酸水溶液,梯度洗脱,纯化后活性单体成分含量明显增加。  研究了沙棘果渣黄酮粗提物和纯化后黄酮的体外抗氧化活性,二者均有一定的抗氧化能力和还原力及清除DPPH·、ABTS·能力。同浓度下粗提物体外抗氧化能力低于纯化后提取物,纯化后提取物的抗氧化能力和还原力较VC弱,但清除DPPH·、ABTS·自由基的能力优于VC。  选用D-半乳糖致衰老小鼠模型,低、中、高剂量组分别给予50、100、200mg/kg.bw.d的纯化后的沙棘果渣黄酮提取物水溶液,八周后,对小鼠进行了水迷宫、紧绳和旷场等行为学实验,结果显示剂量组小鼠的学习认知能力、空间探索能力、记忆能力和体力明显强于D-半乳糖致衰老模型组小鼠。  同时用该模型研究了不同剂量组纯化沙棘果渣黄酮提取物对小鼠体内抗氧化系统的影响。结果表明:沙棘黄酮可显著或极显著提高小鼠的血清、肝脏和脑组织的SOD、T-AOC和GSH-Px酶的活力,降低MDA的含量,中剂量(100mg/kg)和高剂量(200mg/kg)效果较好。
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