离子液体中磁性固定化酶催化合成手性化合物

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磁性聚合物微球具有磁响应性,生物兼容性等特性,是制备固定化酶的优良载体。离子液体具有低的蒸汽压、高热稳定性、环境友好的性质,未来有望成为替代有机物的绿色溶剂。本文采用聚合法制备了两种磁性聚合物微球,分别用于脂肪酶和青霉素G酰化酶的固定化,在离子液体介质中实现了 2-芳基-4-羟基四氢吡喃、1-取代-3-羟基吡咯烷醇的合成与手性拆分,在离子液体-水相共溶剂中实现了头孢羟氨苄的高效合成。通过悬浮聚合技术制备了超顺磁性聚合物微球,微球粒径200-300μm,比表面积26.32m2/g,平均孔径41.21nm,饱和磁强度3.46emu/g,环氧基团含量0.55mmol/g,用于假单胞菌脂肪酶的固定化,用prins环化法以3-丁烯-1-醇和对氯苯甲醛为原料在离子液体1-丁基-3-甲基咪唑四氟硼酸盐([Emim][BF4])中化学法合成外消旋体的2-(4-氯苯基)-4-羟基四氢吡喃。利用磁性固定化假单胞菌脂肪酶对2-(4-氯苯基)-4-羟基四氢吡喃进行转酯化拆分,制备出(2R,4S)-2-(4-氯苯基)-4-羟基四氢吡喃,优化出最佳酶法拆分反应条件,1mL[Emim][BF4]为反应介质,乙酸乙烯酯作为酰化试剂与底物2-(4-氯苯基)-4-羟基四氧吡喃的摩尔比为1 mmo1:0.25 mmol,反应温度35℃,反应时间12h,2-(4-氯苯基)-4-羟基四氢吡喃的转化率为49.9%,底物(2R,4S)-2-(4-氯苯基)-4-羟基四氢吡喃的ee,值达到99.6%,产物(2S,4R)-2-(4-氯苯基)-四氢吡喃-4-醇乙酯的eep值为99.9%,优化条件下对2-(4-甲基苯基)-4-羟基四氢吡喃、2-(4-甲氧基苯基)-4-羟基四氢吡喃、2-苯基-4-羟基四氢吡喃进行了转酯化拆分,所获得的底物(2R,4S)-2-(4-甲基苯基)-4-羟基四氢吡喃、(2R,4S)-2-(4-甲氧基苯基)-4-羟基四氢吡喃和(2R,4S)-2-苯基-4-羟基四氢吡喃的ee8值均高于99%,产物(2S,4R)-2-(4-甲基苯基)-四氢吡喃-4-醇乙酸酯、(2S,4R)-2-(4-甲氧基苯基)-四氢吡喃-4-醇乙酸酯和(2S,4R)-2-苯基四氢吡喃-4-醇乙酸酯的eep分别为92.6%、95%和78.4%。3-吡咯烷醇和苯甲酰氯在离子液体1-丁基-3-甲基咪唑双三氟甲磺酰亚胺盐([Bmim][TNf2])中反应合成外消旋的(R,S)-1-苯甲酰-3-羟基吡咯烷醇,利用磁性固定化假单胞菌脂肪酶对其进行转酯化拆分,优化最佳拆分条件,0.25mmol(R,S)-1-苯甲酰-3-羟基吡咯烷醇,乙酸乙烯酯作为酰化试剂的加入量为12 mmol,反应温度35℃,反应时间32 h,(R,S)-1-苯甲酰-3-羟基吡咯烷醇的转化率为51.7%,底物(R)-1-苯甲酰-3-羟基吡咯烷醇的ee,值达到99.1%,产物(S)-1-苯甲酰-3-羟基吡咯烷醇乙酸酯的eep值为95.4%,经10次重复使用后,(R)-1-苯甲酰-3-羟基吡咯烷醇的ee,为大95.5%,优化条件下对(R,S)-1-甲基-3-羟基吡咯烷醇和(R,S)-1-苄基-3-羟基吡咯烷醇进行转酯化拆分,所获得的底物(S)-1-甲基-3-羟基吡咯烷醇和(S)-1-苄基-3-羟基吡咯烷醇的ee:值均高于99%,产物(R)-1-甲基吡咯烷-3-醇乙酸酯和(R)-1-苄基吡咯烷-3-醇乙酸酯的eep分别为92.5%和85.1%。分散聚合法制备了氨基功能化磁性聚合物微球MP-NH2,用SEM、TEM、XRD、FT-IR等手段对微球MP-NH2进行表征,MP-NH2表面光滑无粘连,粒径为1-2μm,具有超顺磁性,饱和磁强度为13.0emu/g。,在离子液体1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([Bmim][PF6])中用其进行固定化青霉素G酰化酶,获得固定化青霉素G酰化酶的载酶量为515 mg/g,初始活性为3166 U/g,循环使用10次可保持初始活性的91.7%。并且固定化PGA比游离PGA具有更好的热稳定性和酸碱稳定性,在25℃-45℃范围内,固定化PGA的初始活性是游离PGA的3.7倍。研究了固定化PGA在水相、有机相、离子液体和离子液体与磷酸盐共溶剂介质中合成头孢羟氨苄的影响,结果表明,[Bmim][TNf2]和磷酸盐以及[Bmim][PF6]和磷酸盐共溶剂对酶促合成头孢羟氨苄产率和合成水解比的提高有显著性的影响。离子液体的浓度为62.5%,7-氨基去乙酰氧基头孢烷酸(50 mmol/L)与对羟基苯甘氨酸甲酯的摩尔比为1:1.8,温度30℃,反应18 h,头孢羟氨苄的产率为79.0%,合成水解比为1.12。利用响应面优化法对酶促合成头孢羟氨苄的工艺进行了优化,得出最佳反应条件为:50mmol/L7-ADCA,90 mmol/LD-HPGM,[Bmim][TNf2]-PBS 中[Bmim][TNf2]的体积分数为64.7%,温度28.7℃下,反应23.5 h,产率为79.6%,合成水解比为1.19。
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