草鱼（Ctenopharyngodon idella）是我国产量最大的大宗淡水鱼类养殖品种,但草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus,GCRV）感染导致的草鱼出血病严重制约了草鱼养殖业的可持续发展。GCRV是衣壳内含有线性双链RNA基因组的一类病毒,SIDT2（Systemic RNA interference deficient-1（SID1）transmembrane family,member 2）是溶酶体上负责传递病毒ds RNA至RLR受体并引发抗病毒干扰素反应的关键功能蛋白。本研究解析及鉴定了草鱼SIDT2基因（CiSIDT2）的结构特征和功能,以及分析了CiSIDT2的作用位置和调控途径,研究结果将有助于评价和证实SIDT2的抗病毒路径及效应机制,加深对硬骨鱼类抗病毒免疫功能分子机制的理解,并为抗病草鱼选育提供基因资源。本文主要研究结果如下:1、CiSIDT2基因结构特征解析及功能鉴定CiSIDT2基因c DNA全长3180 bp,Gene Bank登录号为MK522167,其中5′非编码区（Untranslated region,UTR）为209 bp,开放阅读框（Open-reading frame,ORF）2478 bp,编码825个氨基酸,3′非编码区493 bp。相对分子质量为93.15 k Da,理论等电点为6.15。CiSIDT2具有SID1家族（具有跨膜ds RNA门控通道的蛋白质家族,不依赖ATP泵的作用,被动地将ds RNA转运到细胞中）典型并保守的结构特性SID1＿RNA＿chan结构域,并含有十个跨膜结构域。在进化关系上,草鱼与赤眼鳟亲缘关系最近。氨基酸多序列比对发现,SIDT2在草鱼和赤眼鳟间的序列保守型最高。CiSIDT2三级结构包含一个SID1＿RNA＿chan结构域和43个α螺旋。研究结果为深入研究CiSIDT2基因的功能奠定基础。荧光定量表达结果显示,CiSIDT2在健康草鱼肝脏、脾脏、肾脏、头肾、鳃、肌肉、皮肤和肠道8个组织中均有表达,但在脾脏组织中的表达量显著高于其他组织（P＜0.05）;草鱼经过Poly I:C（Polyinosinic-polycytidylic acid）和Ⅱ型GCRV两种不同免疫原刺激后,脾脏组织中CiSIDT2 m RNA水平总体表达上调（P＜0.05）,说明SIDT2可能在草鱼抗GCRV免疫反应中发挥重要作用。2、草鱼SIDT2作用位置和调控途径分析在草鱼性腺细胞系（Grass carp ovary,GCO）细胞中瞬时转染,成功实现了CiSIDT2的过表达,亚细胞定位结果显示CiSIDT2广泛表达,分布于整个细胞。CiSIDT2免疫沉淀样品经质谱分析出27种蛋白;取GCRV刺激后的肝脏、脾脏和肾脏进行免疫共沉淀实验,结果显示肝脏和脾脏免疫沉淀样品未检测到MDA5蛋白,但肾脏检测到MDA5蛋白,说明SIDT2可能在MDA5上游发挥作用。分析在GCO细胞中瞬时过表达CiSIDT2并在GCRV刺激状态下SIDT2作用途径对其本身及RLR信号通路中关键基因m RNA水平变化的影响,结果表明SIDT2、MDA5、IRF3、IRF7、I-IFN和Mx的表达量在攻毒后均有不同程度的上调,但LGP2和RIG-I在感染的整个过程中的表达量无显著变化。综上所述,研究结果为深入剖析SIDT2将病毒ds RNA传递给RLR受体成员的转运机制提供线索。