血管内皮细胞生长因子(VEGF)作为一种强有力的血管生长介质,不仅能特异性地作用于血管内皮细胞,刺激细胞分裂、增生和移行,而且在血管成熟和重塑中起着重要作用,促进治疗性血管的新生。VEGF-C是一种特异性的血管、淋巴管内皮细胞调节因子,主要作用为增加血管内皮细胞的通透性,介导淋巴管内皮细胞的趋化性、细胞增殖和淋巴管的增生。许多研究提示,肿瘤的淋巴转移和VEGF-C密切相关。因此,VEGF-C为肿瘤的抗淋巴转移治疗提供新的途径。本研究通过构建VEGF-C基因的pGEX/VEGF-C重组体,在大肠杆菌中表达,获得高效表达的重组VEGF-C蛋白,以进一步研究其结构和功能,深入了解肿瘤发病机制,推进抗肿瘤药物市场的发展。主要研究内容及结果如下:1、本试验采用化学合成法制备VEGF-C基因,插入pGEX-6p-1融合蛋白表达载体中,构建重组质粒pGEX/VEGF-C。经转化宿主菌E.coli BL21,筛选高效率转化子,摇瓶培养,用IPTG诱导高效表达蛋白质。表达产物采用谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析纯化,并用Lowry法测定蛋白含量。2、成功构建了原核表达质粒pGEX/VEGF-C;SDS-PAGE分析显示经IPTG诱导,重组表达质粒pGEX/VEGF-C在大肠杆菌中表达了分子量为61kD左右的融合蛋白;通过优化诱导条件,在16℃、0.4mM IPTG诱导16小时后蛋白的表达量达到高峰。3、在大肠杆菌中表达的重组融合蛋白经谷胱甘肽-琼脂糖亲和层析纯化后得到较高浓度的VEGF-C-GST融合蛋白,同时酶切消化出高纯度的VEGF-C蛋白,蛋白含量为20 mg/ ml。为培养晶体,制备单抗,研究其蛋白结构和功能打下基础。