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[目 的]通过向肺腺癌细胞A549和SPC-A-1中转染miR-18b-mimic和miR-18b-inhibitor构建瞬转细胞系,探索miRNA-18b对肺腺癌细胞A549和SPC-A-1增殖、凋亡、侵袭和转移等生物学特性的影响。探讨miRNA-18b作为肺腺癌骨转移早期诊断的分子标志物及治疗靶点的理论依据,进一步阐明miRNA-18b在肺腺癌骨转移发生发展过程中的功能和临床应用价值,为肺腺癌骨转移的早期诊断和治疗提供重要的理论依据。[方 法]1.通过TargetScan数据库分析,采用双荧光素酶结合实验,验证miRNA-18b与下游靶基因受体相互作用蛋白激酶3（Receptor-interacting protein kinase 3,RIPK3）的靶向调控关系。2.在肺腺癌细胞株A549和SPC-A-1中转染miR-18b-mimic和miR-18b-inhibitor,培养 24h 后,通过实时定量 PCR（Real-time Quantitative PCR,RT-qPCR）在 RNA 水平验证 miR-18b-mimic 和 miR-18b-inhibitor 的转染效率。3.在肺腺癌细胞株A549和SPC-A-1中转染miR-18b-mimic和miR-18b-inhibitor,培养48h后,通过Western Blot在蛋白水平验证下游靶蛋白表达情况,间接验证转染效率。4.向肺腺癌细胞 A549 和 SPC-A-1 转染 miR-18b-mimic 和 miR-18b-inhibitor后,通过CCK8实验,检测miRNA-18b对肺腺癌细胞A549及SPC-A-1的增殖能力的影响。5.向肺腺癌细胞 A549 和 SPC-A-1 转染 miR-18b-mimic 和 miR-1 8b-inhibitor后,通过Transwell细胞侵袭实验,检测miRNA-18b对肺腺癌细胞A549及SPC-A-1的侵袭能力的影响;6.向肺腺癌细胞 A549 和 SPC-A-1 转染 miR-18b-mimic 和 miR-18b-inhibitor后,通过Transwell细胞迁移实验,检测miRNA-18b对肺腺癌细胞A549及SPC-A-1的迁移能力的影响。7.向肺腺癌细胞 A549 和 SPC-A-1 转染 miR-18b-mimic 和 miR-18b-inhibitor后,通过细胞划痕实验,检测miRNA-18b对肺腺癌细胞A549及SPCA-1的迁移能力的影响。8.向肺腺癌细胞 A549 和 SPC-A-1 转染 miR-18b-mimic 和 miR-18b-inhibitor后,通过细胞凋亡实验,检测miRNA-18b对肺腺癌细胞A549及SPC-A-1的凋亡水平的影响。[结 果]1.双荧光素酶结合实验发现:miRNA-18b能够靶向结合RIPK3,即RIPK3是miRNA-18b的下游靶蛋白。2.RT-qPCR 结果显示:与 miR-18b-mimic NC 组相比,转染 miR-18b-mimic后,肺腺癌细胞中的miR-18b的表达量明显上调（P＜0.05）;与miR-18b-inhibitor NC组相比,转染miR-18b-inhibitor后,肺腺癌细胞中的miR-18b的表达量下调水平不显著（P＞0.05）。3.Westren blot 结果显示:与 miR-18b-mimic NC 组相比,转染 miR-18b-mimic后,肺腺癌细胞中RIPK3表达量显著下调（P＜0.05）;与miR-18b-inhibitor NC组相比,转染miR-1 8b-inhibitor后,肺腺癌细胞中的RIPK3表达量显著上升（P＜0.05）。4.细胞增殖实验显示:与miR-18b-mimic NC组相比,miR-18b-mimic组的肺腺癌细胞的OD值呈显著升高（P＜0.05）,说明miR-18b-mimic能够促进肺腺癌细胞的增殖;与miR-18b-inhibitor NC组相比,miR-18b-inhibitor组的肺腺癌细胞OD值呈显著下降（P＜0.05）,说明miR-18b-inhibitor能够抑制肺腺癌细胞的增殖水平。5.细胞侵袭实验显示:与miR-18b-mimic NC组相比,miR-18b-mimic持续转染48h后,肺腺癌细胞的侵袭能力显著增强（P＜0.05）,说明miR-18b-mimic能够促进肺腺癌细胞的侵袭能力;与miR-18b-inhibitor NC组相比,miR-18b inhibitor持续转染48h后,肺腺癌细胞的侵袭能力显著减弱（P＜0.05）,说明miR-1 8b-inhibitor能够抑制肺腺癌细胞的侵袭水平。6.迁移实验（Transwell）结果显示:与miR-18b-mimic NC组相比,miR-18b-mimic持续转染48h后,肺腺癌细胞的迁移能力明显增强（P＜0.05）,说明上调miRNA-18b能够促进肺腺癌细胞的迁移;与miR-18b-inhibitor NC组相比,miR-18b-inhibitor持续转染48h后,肺腺癌细胞的迁移能力显著减弱（P＜0.05）,说明下调miRNA-18b能够抑制肺腺癌细胞的迁移。7.划痕实验结果显示:与miR-18b-mimic NC组相比,miR-1 8b-mimic持续转染24h后,肺腺癌细胞的迁移率明显增加（P＜0.05）,说明miR-18b-mimic能够促进肺腺癌细胞的愈合能力;与miR-18b-inhibitor NC组相比,miR-18b-inhibitor持续转染24h后,肺腺癌细胞的迁移率明显减少（P＜0.05）,说明miR-18b-inhibitor抑制肺腺癌细胞的迁移能力。8.细胞凋亡检测结果显示:与miR-18b-mimic NC组相比,miR-1 8b-mimic持续转染48h后,肺腺癌细胞的凋亡率明显降低（P＜0.05）,说明miR-18b-mimic抑制肺腺癌细胞的凋亡水平;与miR-18b-inhibitor NC组相比,miR-18b-inhibitor持续转染48h后,肺腺癌细胞的凋亡率明显上升（P＜0.05）,说明miR-18b-inhibitor促进肺腺癌细胞的凋亡水平。[结 论]实验结果显示miRNA-18b能够显著影响肺腺癌细胞的增殖、侵袭、迁移和凋亡等生物学特性,其可能与肺腺癌细胞的转移和侵袭有关。抑制miRNA-18b的表达能够抑制肺腺癌细胞的增殖、侵袭及迁移能力,提示miRNA-18b在肺腺癌侵袭转移中,可能发挥着促进肿瘤转移的作用。进一步深入研究miRNA-18b促进肿瘤转移的机制将为阐明肺腺癌骨转移的发生发展机制提供新的重要理论依据,因此miRNA-18b有望成为肺腺癌骨转移早期诊断的生物标志物和潜在的治疗靶点。