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1.目的为了更好地控制广地龙配方颗粒的质量,保证临床疗效,本研究在中医药理论和《中药配方颗粒质量标准研究的技术要求》指导下,对广地龙饮片入选标准、广地龙配方颗粒质量标准进行系统研究,对指标成分次黄嘌呤和琥珀酸进行药效学验证。同时研制地龙凝胶剂并进行初步的药效学评价。2.方法研究内容主要包括:广地龙饮片的入选标准,广地龙配方颗粒的质量标准及稳定性研究,指标成分次黄嘌呤和琥珀酸止咳平喘的药效学验证,地龙凝胶剂的制备及治疗烫伤的药效学初探等。广地龙饮片入选标准研究中,采用薄层色谱法鉴别氨基酸、琥珀酸及氯仿提取物,建立高效液相色谱法及高效毛细管电泳法分别测定次黄嘌呤和琥珀酸含量的方法。高效液相法测定次黄嘌呤含量的色谱条件:色谱柱为ODS-EP 5μm ,4.6 mm×150 mm,流动相为水-甲醇-四氢呋喃(100﹕0.5﹕0.5),流速为1.0 ml/ min ,检测波长λ=254 nm,柱温为室温,理论板数按次黄嘌呤峰计算不低于3888。高效毛细管电泳测定琥珀酸含量的条件:以未涂层融硅毛细管(50 cm×75μm)为分离柱,1mmol/L Tris-10 mmol/L H3BO3-0.5%四乙烯五胺-0.025 mmol/L CTAB (pH=11.45)体系为电泳介质,分离电压为-10KV。还对广地龙饮片进行杂质、水分及浸出物等项目的检查。配方颗粒采用传统汤剂的制备方法,并通过离心除杂、喷雾干燥及制粒获得。以次黄嘌呤的含量为指标,用正交设计法优选有效成分的最佳提取工艺。配方颗粒的薄层鉴别和含量测定与饮片类似,并按照2005版中国药典一部规定的颗粒剂项下对广地龙配方颗粒装量差异、溶化性和含水量进行检查。初步稳定性实验采用实验室留样观察三个月。指标成分的药效学验证分别以组胺和乙酰胆碱混合溶液引喘法及雾化氨水引咳法来评价次黄嘌呤和琥珀酸的止咳平喘作用。地龙凝胶剂的制备选用卡波姆为凝胶基质,并含有甘油和丙二醇等附加成分。药效学实验则分别以烫伤后面积,含水量,羟脯氨酸含量变化以及肉眼观察和病理切片来评价。3.结果广地龙饮片入选标准研究中改进了2005版中国药典一部地龙项下氨基酸薄层鉴别方法,增加丙氨酸的斑点,并增加了琥珀酸的斑点鉴别;HPLC测得不同产地的广地龙次黄嘌呤含量为0.54～1.25 mg/g;HPEC测得药材中琥珀酸(产地:广西)含量为0.8 mg/g。广地龙配方颗粒制备研究中,确定最佳提取工艺条件为:取广地龙30g,剪碎,加入12倍量的水,浸泡1小时,煎煮3次,过滤,合并煎煮液,浓缩。广地龙配方颗粒质量标准研究中,配方颗粒的次黄嘌呤含量测定方法色谱条件与饮片一致,不同批号的配方颗粒次黄嘌呤含量为1.5～3.3mg/袋。稳定性实验:实验室留样观察三个月,按质量标准项目检查,包括外观、鉴别、检查、含量测定、卫生学,均符合规定。小鼠的哮喘和咳嗽实验证明次黄嘌呤、琥珀酸有止咳平喘疗效。选择这两个成分作为指标成分是合理的。地龙凝胶剂治疗烫伤实验中受伤面积数据表明广地龙无糖凝胶和广地龙含糖凝胶对烫伤有治疗作用。含水量实验数据表明广地龙无糖凝胶和广地龙含糖凝胶可减少水肿。羟脯氨酸含量测定数据表明广地龙含糖凝胶使烫伤部位恢复较快。4.结论本研究建立的广地龙饮片和配方颗粒质量控制方法规范,科学,通过药效学的验证,说明以次黄嘌呤和琥珀酸含量作为控制广地龙饮片及配方颗粒质量的合理性,为广地龙及其产品的质量控制提供科学依据。另外本课题对广地龙促进伤口的愈合作用的制剂及药效学的进行初步研究,为今后广地龙外用制剂的开发奠定了一定的基础。