研究目的 病毒和寄生虫感染产生的慢性炎症是大多数癌症发生的危险因素，特别是肝癌，乙型肝炎病毒和丙型肝炎病毒感染导致的慢性肝炎是肝癌发生的主要原因。我国肝癌的发生大多与肝炎病毒的感染有关，尽管不断有新的肝炎病毒被发现，但仍有部分肝癌及慢性肝病的病因不明。幽门螺杆菌(H.pylori)与胃癌、胃淋巴瘤的密切联系已为许多研究所肯定，1994年世界卫生组织将幽门螺杆菌列为第一类致癌因子。已有研究发现几种螺杆菌与某些动物的肝脏疾病相关。特别是肝螺杆菌所致的小鼠肝癌已成为研究癌变机制的动物模型。是否部分肝病或肝癌是由螺杆菌感染所致?因此，人肝组织螺杆菌的鉴定，是令人感兴趣和极有价值的研究内容。本研究的目的旨在探讨螺杆菌感染是否与人类肝癌的发生相关。 研究方法 1．首先回顾性调查石蜡肝组织中螺杆菌感染情况，选取经病理诊断的肝癌组织38例，肝硬化15例，慢性肝炎12例，肝良性肿瘤15例，采用聚合酶链反应(PCR)检测了螺杆菌16S rRNA基因(即16S rDNA，400bp)及H.pylori的种特异性抗原(26-kDa蛋白)基因和相关功能基因(cagA，vacA，glmM，rps4)，16S rRNA基因的PCR产物用Southern印迹杂交确认，部分产物测序并进行同源比较。另外通博士学位论文 中文摘要过 H pylon免疫组化染色观察细菌形态。2．研究新鲜肝癌组织中螺杆菌感染情况。选取经病理诊断的肝癌组织及癌旁组织 20例为研究对象，非肝癌组织 16例作对照，培养分离螺杆菌，并扩增螺杆菌 16s rKN’A基因 （ 200hP）及 H Pylon的特异基因和相关功能基因。3．通过扩增有现症 H pylon感染的消化性溃疡患者外周血中螺杆菌的核酸来明确螺杆菌能否进入外周血；将H pylon与不同浓度的胆汁①刀 1％叫．8％）共同培养，观察 H pylon的生长及形态学的变化，以明确它对胆汁有无耐受性。 研究结果1．石蜡肝癌组织中螺杆菌基因的检测结果 在38例肝癌标本中有20例扩增出400hp 的目的片段，卜性率52＊％，而非肝癌组无1例阳性，二者差异显著阶＜0．01卜所有＊＊R产物用和山em杂交得到证实。10例测序及同源比较显示，肝癌组织中的螺杆菌 16s rDNA序列与 H pylon的 16s n＞NA序列有 99刀％叶％的同源性。20例螺杆菌 165 rRNA基因阳性的石蜡标本再用 26－ica基因的引物扩增，结果有 14例显示阳性，阳性率 70％。但这 20例标本中仅 3例扩增出cagA基因，4例扩增出J 基因，无1例扩增出vacA基因和pS4基因。2．肝组织Hpyori免疫组化染色结果38例肝癌标本中有16例 V 广 J博士学位论文 中文摘要观察到了弯曲状或杆状的细菌存在，阳性率42％。而对照肝组织中未检测到细菌的存在。3．细菌培养 培养 20例肝癌及 16例非肝癌标本，连续观察至培养的第10大，均无细菌生长。4．新鲜肝癌组织中螺杆菌基因的检测结果20例肝癌组织中有8例发现螺杆菌核酸的存在，其对应的癌秀组织大部分亦阳性门用人而非肝癌组无一例阳性中动刀1人所有PCR产物用Southern杂交得到证实。6例测序及同源比较显示，肝癌组织中的螺杆菌 16s rDNA序列与 H Pylon的 165 rDNA序列有 98．5％opg％的同源性。阳性标本中26－kDa基因大部分亦阳性门用人 但仅2例扩增出cagA基因，2例扩增出J 基因，一直未扩增出 vacA基因和 ps4基因。5．外周血螺杆菌核酸的检测情况 25例有H pylon现症感染的消化性溃疡患者中，有 5例Q0％）螺杆菌 165 rRNA基因阳性，其中又有4例H pylon 26－aha基因阳性，3例检测出vacA基因和ps4基因，2例检测出glmM基因，均未检测出cagA基因。6．H pylon对胆汁的耐受性 购＊％的胆汁对 H pylon无影响，0．1％叶．2％的胆汁部分抑制 H pylon的生长，gi．4％的胆汁完全抑制H Pylon的生长。H Pylon在胆汁培养基中可出现球形体和丝状体，但耐受胆汁后形态可恢复正常。 VI