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研究目的:多发性硬化（Multiple sclerosis,MS）是一种以中枢神经系统炎性脱髓鞘为主要病理特点的自身免疫性疾病。其病因尚不明确,可能与遗传、环境及感染等多种因素相关。MS以2040岁起病多见,全世界共有数百万人受累。目前MS的治疗以药物治疗为主,但这些非特异性的药物治疗方法仅对部分患者有效,仍有不少患者饱受无药可治的痛苦。因此,寻找特异性免疫调节方法治疗MS,是亟待解决的问题。实验性自身免疫性脑脊髓炎（Experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE）是MS的经典动物模型,它具有与人类MS相似的临床特点及病理特征,因此被广泛应用于MS发病机制及临床治疗的研究。树突状细胞（Dendritic cell,DC）是能够直接激活T细胞的专职抗原提呈细胞,它在获得性免疫应答的启动和进展中起到重要作用。一方面,DC在MS的发病中能够启动自身反应性免疫应答,另一方面,它还可以促进并维持免疫耐受,而后者可为MS和EAE的特异性免疫治疗提供新的靶点。RelB是核转录因子kappa B（Nuclear factor kappa B,NF-κB）家族成员之一,它在DC中大量表达并参与了DC的生长、分化和凋亡等多个过程。在NF-κB成员中,RelB与DC的分化和成熟关系最为密切,它在DC成熟的过程中表达上调。因此,本研究拟应用RelB短发夹RNA（RelB short hairpin RNA,RelB-shRNA）慢病毒载体转染DC,降低DC中RelB的表达,从而诱导出耐受性DC,并将这些转染后获得的耐受性DC经尾静脉回输给EAE小鼠,探究其对EAE的治疗作用。研究方法:1.将MOG35-55肽段与完全弗氏佐剂的混合乳液皮下注射于C57BL/6小鼠的背部,并在模型建立的当天和48小时后给予每只小鼠300ng百日咳毒素腹腔注射,从而建立EAE动物模型。取小鼠股骨和胫骨中的单个核细胞,在培养基内加入白介素-4（Interleukin-4,IL-4）和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor,GM-CSF）,从而诱导DC;2.于EAE小鼠DC培养的第8天,提取EAE-DC中的RNA和蛋白,检测RelB的表达量;3.在DC培养的第6天,向DC培养基中加入RelB-shRNA慢病毒载体,转染48小时后,获得耐受性DC（RelB-shRNA DC）。提取RNA和蛋白,检测转染后DC中RelB的表达量。通过流式细胞术检测细胞（分为四组:DC、RelB-shRNA DC、DC+脂多糖、RelB-shRNA DC+脂多糖）表面CD80、CD83、CD86、主要组织相容性复合物-II（Major histocompatibility complex-II,MHC-II）和程序性死亡受体-配体1（Programmed death-ligand 1,PD-L1）的表达情况,并用流式微球分析技术检测细胞培养上清中TNF、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10和IL-17A等细胞因子的分泌情况。4.于EAE小鼠模型建立后的第10、13、16天,将RelB-shRNA DC回输给EAE小鼠（两个对照组分别给予PBS和正常DC）,观察各组的治疗效果,并比较各组小鼠血清中TNF、IL-2、IL-4、IL-6、IL-10、IL-17A等细胞因子分泌水平以及脊髓脱髓鞘情况、炎性细胞浸润情况之间的差异。研究结果:1.MOG35-55肽段与完全弗氏佐剂混合乳液皮下注射,并给予百日咳毒素腹腔注射,可成功建立EAE模型。在培养基中加入IL-4和GM-CSF可将骨髓中的单个核细胞诱导成DC;2.EAE小鼠DC中RelB RNA和蛋白的表达量均较正常小鼠高;3.应用RelB-shRNA慢病毒载体转染DC可显著减少DC中RelB的表达,转染后的DC（RelB-shRNA DC）表面CD83、CD86和MHC-II的表达减少,IFN-γ的分泌水平降低,IL-2和IL-4的分泌水平增加。加入脂多糖刺激后,RelB-shRNA DC表面CD86、MHC-II的表达以及IFN-γ、IL-17A的分泌水平明显低于正常DC;4.与PBS组相比,DC组与RelB-shRNA DC组EAE小鼠的症状均明显减轻,且RelB-shRNA DC的治疗效果明显优于DC。DC组与RelB-shRNA DC组EAE小鼠脊髓中炎性细胞浸润较PBS组显著减少,与DC组相比,RelB-shRNA DC组EAE小鼠脊髓中炎性细胞浸润较少。RelB-shRNA DC组EAE小鼠脊髓脱髓鞘改变较PBS组与DC组轻。DC组EAE小鼠血清中IL-2的水平明显低于PBS组。结论:1.应用MOG35-55肽段免疫C57BL/6小鼠可成功建立EAE模型;2.EAE小鼠DC中RelB的表达较正常DC高;3.体外应用RelB-shRNA慢病毒载体转染DC可诱导出耐受性DC（RelB-shRNA DC）;4.RelB-shRNA DC回输能有效减轻EAE小鼠的症状,并减轻EAE小鼠脊髓中炎性细胞浸润和髓鞘脱失。