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随着我国养殖行业的快速发展,大规模、高密度的集约化养殖模式以及疫病流行、抗生素滥用等多种外界有害因素的刺激,导致氧化应激问题在家畜养殖过程中普遍存在,而氧化应激则是众多疾病发生和发展的重要诱导或促进因素。对于养殖行业而言,解决氧化应激问题,对于家畜健康养殖十分重要。本研究以猴头菇为原料,利用响应曲面法优化猴头菇水提醇沉法获得粗糖,而后使用DEAE-52纤维素纯化粗糖得到纯化的多糖。以猪肠道上皮IPEC-J2细胞为研究对象,应用H2O2构建氧化应激损伤模型,采用MTT法测定H2O2最佳作用剂量和猴头菇多糖的安全浓度。同时测定1PEC-J2细胞胞内ROS水平以及细胞抗氧化、细胞膜通透性、凋亡的相关指标。通过RT-PCR和Western Blot技术观察猴头菇多糖对氧化应激状态下IPEC-J2细胞紧密连接相关ZO-1、Claudin-1、Occludin基因和蛋白表达情况的影响。试验结果如下:(1)通过利用响应曲面法优化猴头菇多糖的提取工艺,得到最佳的提取条件为:提取时间为3.8 h,液料比为25 mL/g,提取温度为81℃,提取率为3.09%。(2)利用MTT法测定过氧化氢和猴头菇多糖对IPEC-J2细胞增殖率的影响,得到的过氧化氢最佳氧化应激浓度为0.4mM,猴头菇多糖的安全浓度为20～500μg/mL,选取50μg/mL,100μg/mL,200μg/mL作为猴头菇多糖低、中、高剂量组。(3)经过猴头菇多糖预处理的IPEC-J2细胞,氧化应激状态下细胞胞内ROS含量的水平显著降低,抑制脂质过氧化的进程,胞内SOD、CAT酶活力也显著升高,增强了抗氧化能力。同时HEPs保护细胞线粒体膜电位具有极性,抑制了细胞凋亡的进行;LDH的释放率降低,说HEPs有效地维护细胞膜的完整性,显著改善氧化应激下膜的通透性。(4)利用过氧化氢构建的IPEC-J2细胞的氧化应激模型中,过氧化氢显著地下调了紧密连接的ZO-1、Claudin-1和Occludin的基因和蛋白表达水平。在基因水平上,高剂量的HEPs均能够在一定程度上提高氧化应激状态下ZO-1、Claudin-1和Occludin的转录水平。在蛋白表达水平上,中剂量和高剂量的HEPs均能提高氧化应激状态下ZO-1、Claudin-1和Occludin的蛋白表达水平。因此,HEPs在一定程度上提高了氧化应激状态下IPEC-J2细胞的紧密连接ZO-1、Claudin-1和Occludin基因和蛋白表达水平,保护了细胞膜屏障功能的作用,提高细胞的存活率。研究结果表明,猴头菇多糖可以提高氧化应激状态下IPEC-J2细胞的抗氧化能力,抑制凋亡进程的进行。在分子水平上,HEPs明显提高了细胞紧密连接相关的ZO-1、Claudin-1和Occludin基因和蛋白表达水平,有助于维护肠道机械屏障的完整性和正常通透性,降低了肠道受外源性抗原侵害的几率。