安宫宁贴剂是由黄芩单方组成。在原安宫宁胶囊制剂研究的基础上采用现代中药新技术提取精制方法,从黄芩中提取有效部位,使达到新五类中药制剂对有效部位含量50%要求,将其由原胶囊制剂改革为贴剂作了一些尝试性研究。为安宫宁新药研究奠定了一定的试验基础。 本课题首先进行了安宫宁贴剂中提取的有效部位的初步药效学筛选实验,通过离体小鼠子宫抑制实验确定了有效成分的部位,为提取工艺的设计和实验奠定了研究方向;通过一系列的正交设计法优选了切实可行的优化提取工艺、精制纯化工艺以及制剂成型工艺;质量标准方面对黄芩原药材及安宫宁贴剂进行了薄层色谱定性鉴别的研究,对有代表性成分黄芩苷、汉黄芩素进行了含量测定研究,制定了控制该制剂质量的质控指标;针对主要成分,通过含量测定,进行了安宫宁贴剂的体外释放度实验以及离体透皮吸收实验;采用常温考察方法,对安宫宁贴剂进行了初步稳定性考察研究。实验结果如下: 选择的提取工艺:经过进行不同浓度乙醇提取正交实验、以及水提后药渣再用乙醇提取正交实验的比较,发现后一种提取方式中黄酮类成分损失较少,选择的提取工艺为:先以水提取黄酮苷类成分,药渣再用乙醇提取黄酮苷元类成分。优选提取工艺为处方中黄芩先用水煎煮提取,每次加水量为12倍,每次煎煮1.5h,煎煮三次;药渣晾干后,再以5倍量85%乙醇,回流提取三次,每次提取1.0h,有效成分提取较为完全。 优选的精制工艺:针对不同有效成分采用了不同的精制方法。水提取部分通过醇沉正交试验得到优选的醇沉工艺,即水溶液浓缩至比重为1.05,加乙醇至含醇量40%,沉淀24h,离心,将上述溶液,上样于经动态和静态筛选得到的最适宜的AB-8型大孔树脂,通过正交试验优选出的最佳大孔树脂吸附条件,同时通过吸附曲线及洗脱曲线,确定上样量,乙醇洗脱溶度和洗脱用量,得到适宜的大孔树脂处理方案,从而得到水溶性有效部位;醇提取部分通过不同提取方法的筛选,确定用乙酸乙酯处理得到脂溶性有效部位;优选的精制工艺通过放大试验,证明是可行的。 优选的制剂工艺:安宫宁贴剂是在湖北中医学院研究的中药膏贴剂型基础上进行研制的,通过预实验确定了成型辅料:甘油、月桂基硫酸钠、石蜡、单甘酯、凡士林及基质用量范围,并进行正交试验研究。贴剂制备的优选制剂工艺为:每张贴剂加入基质甘油0.4g,单甘酯0.3g,石蜡0.3g,凡士林0.4g,月桂基硫酸钠0.1g,加载体制成成品包装即可。 质量标准研究:采用聚酰胺薄膜层析进行鉴别,在色谱图中:安宫宁贴剂中黄芩苷、汉黄芩素色谱斑点清新,特征性强,重现性好,阴性无干扰;以高效安宫宁贴剂的实验研究液相色谱法(反相液相色谱法)测定安宫宁贴剂中黄琴普,汉黄琴素含量,固定相:ZORBAX SBC一18色谱柱(4.6 X 250~),流动相:甲醇一水一磷酸(体积比58二42二0.05);黄芬普和汉黄琴素的平均回收率分别为96.5%和101.9%,RSD值分别为0.99%和1.26%。黄琴昔和汉黄答素的含量测定方法的重现性的RSD值分别为2.20%和2.63%。安宫宁贴剂所含有效成分以黄琴昔,汉黄答素含量作为本品的质量控制指标,每张安宫宁贴剂中黄芬昔含量约为IO0mg,汉黄答素的含量约为smg;本品通过含膏量、耐热性(方法自定)、粘性(方法自定)、重量差异等项目检查,合格; 体外释放度及离体透皮吸收实验表明:随着时间延长,安宫宁贴剂中黄答普,汉黄芬素的释放度和透皮率逐渐增加,汉黄答素在水中SOmin的释放度为50.1%,在48h透皮率为25.4%。 初步稳定性研究:安宫宁贴剂性状、鉴别、检查、含量测定等项结果显示,安宫宁贴剂在三个月内未发生明显变化。 原药材初步研究:对山东沂县、山东营县、河北安国、河北承德四个产地的黄冬药材中黄答昔和汉黄琴素的含量进行了测定,结果显示:产地不同,黄芥所含有效成分,指标成分含量不同,用这两个指标可以反映一定的情况,但要想控制黄答原材料质量,还需要更多黄酮类指标成分。关键词安宫宁贴剂正交设计工艺研究质量标准: 大孔树脂黄答昔汉黄荃素