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目的:慢传输型便秘(slow transit constipation,STC)是一类以胃肠动力减弱为主要特点的顽固性便秘,其发病机制较为复杂,目前尚缺乏深入的认识。大黄是传统中药,具有显著的致泻和促进肠道蠕动的作用,但是其具体机制目前尚不清楚。为了进一步探讨大黄治疗便秘的机制,在既往研究工作的基础上,我们应用复方苯乙哌啶建立大鼠慢传输型便秘模型,使用大黄治疗便秘大鼠后,观察结肠神经病理学改变,利用蛋白质组技术筛选和分析便秘大鼠结肠组织中介导大黄生物学作用的蛋白质分子,从蛋白质水平研究便秘的发生机制,为临床防治慢传输型便秘及为研究新型治疗便秘的药物筛选作用靶点。 方法:以复方苯乙哌啶为造模药物,给药剂量为8mg/kg体重,建立大鼠慢传输型便秘模型。然后饲以含大黄粉的干饲料,剂量为480mg/kg体重,40天后,采用活性炭灌胃法测定肠道传输速度,同时进行结肠肌电检测。然后处死大鼠,取近侧(距盲肠约1cm)及远侧(距肛门约2cm)的结肠组织进行HE染色;对结肠肌间神经丛标本,采用组织化学染色法,显示大鼠结肠肌间神经丛内AchE能神经和NOS能神经;碘化锌—锇酸(ZIO)染色显示大鼠结肠神经系统内的ICC。将0.3g结肠组织(去除浆膜层)在液氮中充分研磨,称重后按1ml/100mg的比例加入蛋白裂解液,提取大鼠结肠组织蛋白质进行双向凝胶电泳。考马斯亮兰染色及脱色,对胶上消化后的差异蛋白点进行质谱分析。获得的肽序列数据用Mascot软件在NCBI的nr数据库中搜寻。 结果:(1)便秘组大鼠肠道传输速度比正常对照组明显减慢,首粒黑便排出时间为357±24min,较对照组大鼠显著延长(241±37min,p<0.01)。大黄治疗组大鼠肠道传输速度与便秘组相比明显加快,差异显著(255±15min,P<0.01)。(2)便秘组大鼠结肠慢波出现双向改变,大黄治疗后频率减慢组便秘大鼠结肠慢波频率明显加快(8.62±1.20次/min vs便秘组5.60±1.20次/min,p<0.01),振幅减少(0.33±0.05m vs便秘组0.46±0.05 mv,p<0.01),波形仍表现为不规则的近似正弦波样曲线;频率加快组便秘大鼠经大黄治疗后结肠慢波频率明显减慢,(23.21±3.86次/min vs便秘组30.23±3.86次/min,p<0.01),振幅强弱不等(0.19±0.03 mv vs便秘组0.20±0.03 mv,p<0.01),波形较不稳定,且出现基线位移。(3)结肠切片HE染色发现便秘组大鼠均显示