目的:以整合素-FAK/Src/Rac1信号通路为切入点,探讨温肾壮骨方及活性成分抗乳腺癌骨转移的作用靶点及分子机制。方法:1.应用Real-time PCR、Western blot、免疫组织化学等方法检测温肾壮骨方干预前后乳腺癌骨转移组织中整合素基因及蛋白表达情况。2.选取人乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231、MDA-MB-231BO、正常乳腺上皮细胞MCF-10A通过MTT、SRB、划痕愈合实验、Transwell小室实验,考察温肾壮骨方不同化学成分（蛇床子素、异补骨脂素、花椒毒素、补骨脂素、欧前胡素、佛手柑内酯）对人乳腺癌细胞恶性生物学行为的影响,筛选抗乳腺癌转移活性最强、毒性最小的单体成分。3.通过mRNA转录组测序、real-time PCR、western blot及免疫荧光,筛选蛇床子素干预MDA-MB-231BO乳腺癌细胞48 h后差异基因及富集通路。采用慢病毒包装构建整合素敲减乳腺癌细胞株,并检测蛇床子素干预对乳腺癌细胞中FAK/Src/Rac1信号分子及肿瘤转移标志性分子基因及蛋白表达的影响。结果:1.与正常骨组织相比,乳腺癌骨转移组织中整合素ITGα3、ITGβ3、ITGβ5基因和蛋白的表达均明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,而经温肾壮骨方干预后,表达量显著下降（P＜0.05或P＜0.01）。2.温肾壮骨方6种成分对MDA-MB-231、MDA-MB-231BO、MCF-7细胞增殖能力均具有明显的抑制作用,且呈剂量依赖关系（P＜0.05或P＜0.01）。其中,蛇床子素干预不同转移能力乳腺癌细胞48 h（MDA-MB-231、MDA-MB-231BO、MCF-7）的IC50值分别是23μg/m L,7μg/m L、133μg/m L,均低于其他成分。而对于正常乳腺上皮细胞MCF-10A,5、10μg/m L的蛇床子素则显著促进细胞增殖（P＜0.05或P＜0.01）。蛇床子素、异补骨脂素、花椒毒素能显著抑制高转移MDA-MB-231BO、MDA-MB-231细胞的侵袭及迁移能力（P＜0.05或P＜0.01）,其中蛇床子素抑制作用最明显。综合以上结果表明蛇床子素抑制乳腺癌细胞增殖、侵袭、迁移的活性最强,而对正常细胞的毒性最低。3.mRNA转录组测序及验证结果显示,相对于正常乳腺上皮细胞MCF-10A,整合素基因（ITGαV、ITGα3、ITGα5、ITGβ1、ITGβ3、ITGβ5、ITGβ6）在高骨转乳腺癌细胞MDA-MB-231BO中高表达（P＜0.05或P＜0.01）。相关性分析显示,整合素基因ITGα3、ITGβ5与乳腺癌细胞转移能力的大小呈显著正相关（P＜0.01）,敲减ITGα3或ITGβ5基因后,高转移乳腺癌细胞MDA-MB-231、MDA-MB-231BO的迁移和侵袭能力明显下降,且下游信号FAK、Src和paxillin的磷酸化、Rac1及转移标志性分子HSP70、moesin、S100A基因和蛋白表达显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。此外,蛇床子素及ITGα3、ITGβ5的敲减都能下调两种高转移乳腺癌细胞中ITGα3、ITGβ5介导FAK/Src/Rac1通路信号分子基因和蛋白的表达（P＜0.05或P＜0.01）。结论:温肾壮骨方能够通过下调乳腺癌骨转移组织中整合素的基因和蛋白表达,发挥其抗乳腺癌骨转移的作用;在温肾壮骨方6种有效成分中,蛇床子素抑制不同乳腺癌细胞增殖、侵袭、转移能力的活性最强、对正常乳腺上皮细胞的毒性最小;蛇床子素能够通过下调高转移乳腺癌细胞（MDA-MB-231、MDA-MB-231BO）中整合素ITGα3、ITGβ5介导的FAK/Src/Rac1信号分子的磷酸化,产生抗肿瘤侵袭转移的效应。