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目的：探讨补肾填精方对D-半乳糖衰老模型大鼠学习记忆能力以及脑组织抗氧化能力的影响,并从细胞衰老的角度出发,观察补肾填精方对细胞周期蛋白依赖性激酶(cyclin-dependent kinase,CDK)抑制因子p53、p21和p16蛋白表达与基因转录的影响,以期揭示补肾填精方防治脑衰老及可能的作用机制。
方法：60只SD大鼠随机分为正常组,模型组,天保宁组,补肾填精方低剂量组、中剂量组、高剂量组,每组10只。采用皮下注射D-半乳糖120mg·kg-1·d-1法造模45天,同时服用对应药物。用Morris水迷宫法检测各组大鼠的学习记忆能力,用比色法测定各组大鼠脑组织超氧化物岐化酶(superoxide dismutase,SOD)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase, NOS)活性,丙二醛(malondialdehyde,MDA)、过氧化脂质(lipid peroxide,LPO)含量。同时检测各组大鼠脑组织细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(senescence-associated β-galactosidase,SA-β-gal)的阳性表达,以鉴定脑细胞的衰老状态,用流式细胞术检测细胞周期。免疫组化法检测各组大鼠脑海马CA1区CDK抑制因子p53、p21和p16蛋白表达,用RT-PCR法检测CDK抑制因子p53、p21和p16基因转录。
结果：补肾填精方能够缩短D-半乳糖衰老模型大鼠Morris水迷宫中找到平台时间(P<0.05),提高衰老模型大鼠脑组织SOD、NOS活性(P<0.05),减少MDA、LPO含量(P<0.05);能够减少模型大鼠脑组织细胞衰老特异性代谢产物SA-β-gal阳性表达(P<0.05),具有促进细胞周期进程的趋势。对海马CA1区CDK抑制因子p53、p21和p16阳性蛋白的表达,补肾填精方有一定的抑制作用(P<0.05),并能下调对应p53、p21的基因转录(P<0.05)。
结论：补肾填精方能够改善D-半乳糖衰老模型大鼠的学习记忆能力,提高脑组织的抗氧化能力,延缓脑的衰老。同时,补肾填精方能够降低CDK抑制因子p53、p21和p16的蛋白表达,下调p53和p21的基因转录,促进细胞周期的进程,延缓细胞衰老,是补肾填精方防治脑衰老的机制之一。