【摘 要】
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目的:分别从细胞水平（RAW264.7细胞和Caco-2细胞）和分子水平（COX-2酶）两方面辨识穿心莲中的药效组分群,并研究这些活性成分发挥抗炎作用的最佳配比,为全面研究穿心莲中的抗炎药效成分提供参考,为研究单味药内部活性成分间的协同配伍效应提供思路。方法:（1）先将穿心莲乙醇提取物分别与RAW264.7细胞、Caco-2细胞、COX-2酶等靶标共孵育一段时间,随后通过缓冲溶液洗涤除去未与靶标结
【基金项目】
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国家自然科学基金项目:——“药效组分群”导向的穿心莲制剂热处理过程质量动态控制方法研究（81560649）；
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目的:分别从细胞水平（RAW264.7细胞和Caco-2细胞）和分子水平（COX-2酶）两方面辨识穿心莲中的药效组分群,并研究这些活性成分发挥抗炎作用的最佳配比,为全面研究穿心莲中的抗炎药效成分提供参考,为研究单味药内部活性成分间的协同配伍效应提供思路。方法:（1）先将穿心莲乙醇提取物分别与RAW264.7细胞、Caco-2细胞、COX-2酶等靶标共孵育一段时间,随后通过缓冲溶液洗涤除去未与靶标结合的成分,再用合适的化学试剂将与靶标结合的成分分离出来。（2）通过超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱（UPLC-Q-TOF-MS）分析检测,比较穿心莲乙醇提取物与靶标结合前后的质谱图,结合对照品与文献质谱信息,确定活性成分结构。（3）采用NO抑制试验、COX-2抑制试验、分子对接和网络药理学等体外试验方法验证各成分的抗炎活性。（4）采用PB-BBD响应面法优化筛选出的所有活性成分发挥抗炎作用的最佳配比,验证其可靠性。结果:（1）与RAW264.7细胞结合的穿心莲成分有9个,包括穿心莲黄酮苷E、穿心莲黄酮苷D、新穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、5,7,2’,3’-四甲氧基黄酮、β-谷甾醇、5-羟基-7,2’,3’-三甲氧基黄酮、5-羟基-7,8,2’,3’-四甲氧基黄酮和1种未知内酯类成分,包括5个黄酮类成分、3个内酯类成分和1个甾醇类成分。同时,通过体外试验初步验证出穿心莲中的各活性成分群间具有协同配伍抗炎作用。（2）经Caco-2细胞筛选出12,13-双氢穿心莲内酯、黄芩黄酮I-2’-O-葡萄糖苷、穿心莲内酯、14-脱氧-11,12-二脱氢穿心莲内酯苷、7-羟基脱水穿心莲内酯、新穿心莲内酯、3-去氧脱水穿心莲内酯苷、去氧穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯和1种未知内酯类成分等10个活性成分。其中,有9个内酯类成分和1个黄酮类成分。（3）通过COX-2酶筛选出了穿心莲内酯、14-脱氧-11,12-二脱氢穿心莲内酯苷、穿心莲黄酮苷E、穿心莲黄酮苷D和去氧穿心莲内酯等5个活性成分,包括3个内酯类成分和2个黄酮类成分。COX-2抑制试验、分子对接和网络药理学方法均验证了这些活性成分的COX-2抑制活性。（4）当穿心莲中的穿心莲内酯、脱水穿心莲内酯、穿心莲黄酮苷E、14-脱氧-11,12-二脱氢穿心莲内酯苷、新穿心莲内酯、去氧穿心莲内酯和β-谷甾醇的浓度分别为9、9、9、2、2、2、2μg/m L时,抗炎作用最强。结论:本研究通过建立稳定可靠的“生物亲和-UPLC-Q-TOF-MS”方法从穿心莲中筛选鉴定出15种抗炎药效组分群,从细胞和分子水平验证其抗炎活性,并通过PB-BBD试验优化其活性成分抗炎最佳配比。该方法还可用于筛选其他复杂天然产物中的活性成分,为研究其组分间的协同配伍关系奠定基础,为研发新的安全有效的中药制剂提供新思路。
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