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研究目的：使用液相色谱-串联质谱（LC-MS／MS）技术鉴定脾虚痰聚证与气郁化火证抽动障碍患儿间以及抽动障碍患儿与健康对照儿童间的相关差异蛋白；再通过ELISA技术对脾虚痰聚证与气郁化火证抽动障碍患儿间以及抽动障碍患儿与健康对照儿童间的相关差异蛋白进行蛋白质定量分析，并探讨相关差异蛋白的临床意义。
研究方法：1.将课题组前期通过MB-WCX结合MALDI-TOF-MS技术筛选出的2个(Mr：6642.04、873.73)关于脾虚痰聚证和气郁化火证抽动障碍患儿间以及8个（Mr：6643.34、6642.05、2293.11、2277.19、2192.84、2175.98、1869.76、863.13）关于抽动障碍患儿与健康儿童间的相关差异蛋白作为目标蛋白或肽段，使用高效液相色谱(HPLC)对60例抽动障碍患儿及30例健康对照儿童的磁珠提取液进行分离纯化，并应用液相色谱-串联质谱（LC-MS／MS）技术进行质谱分析，再用Mascot合并ProteomeDiscover2.0软件，检索质谱分析所得的原始数据并与uniprot_human_fasta数据库进行连接、比对数据及匹配寻找相应的差异性蛋白质。2.使用酶联免疫吸附测定(ELISA)分别对脾虚痰聚证与气郁化火证抽动障碍患儿间及抽动障碍患儿与健康对照儿童间的相关差异蛋白进行蛋白质定量分析。
研究结果:1.经质谱鉴定分析后得出Mr为1869.76的蛋白质或肽段其序列为K.MAVTFIGNSTAIQELFK.R，蛋白名称为TUBB；Mr为2191.84的蛋白质或肽段其序列为T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A，蛋白名称为FGA1；Mr为2175.98的蛋白质或肽段其序列为R.LAPITSDPTEATAVGAVEASFK.C，蛋白名称为PKM2；Mr为2277.19的蛋白质或肽段其序列为K.WGDAGAEYVVESTGVFTTMEK.A，蛋白名称为GAPDH；Mr为863.13的蛋白质或肽段其序列为R.LGEYDLR.R，蛋白名称为PROC；Mr为873.73的蛋白质或肽段其序列为R.EIFNMA.R，蛋白名称为APOB；Mr为6643.34、6642.05、6642.04、2293.11的蛋白质或肽段在质谱鉴定过程中，未找到与其匹配的相关蛋白。2.通过ELISA对脾虚痰聚证与气郁化火证儿童抽动障碍患儿血清中的APOB蛋白质进行定量分析，得到APOB在儿童抽动障碍脾虚痰聚证中高表达，在儿童抽动障碍气郁化火证中低表达；对儿童抽动障碍组和健康对照组血清中的TUBB、FGA1、PKM2、GAPDH、PROC等蛋白质进行定量分析，得到TUBB、FGA1、PKM2、GAPDH、PROC等蛋白质均在儿童抽动障碍组中低表达，在健康对照组中高表达。
研究结论及意义：通过对课题组前期筛选出的10个相关差异蛋白进行鉴定与验证得出：APOB在抽动障碍儿童脾虚痰聚证与气郁化火证中差异表达，该蛋白可能为区分这两种中医证型的血清特异性蛋白质；FGA1、PKM2在抽动障碍患儿与健康对照儿童血清中差异表达，这两种蛋白有可能为儿童抽动障碍患儿的血特异性蛋白质；TUBB在TD组中低表达，在健康对照组高表达，但与前期结果不一致；GAPDH、PROC在TD组中低表达，在健康对照组高表达，但表达无统计学意义；Mr为6643.34、6642.05、6642.04、2293.11的蛋白质或肽段在质谱鉴定过程中，未找到与其匹配的相关蛋白。通过本课题的研究，不仅得到了脾虚痰聚证与气郁化火证抽动障碍患儿间以及儿童抽动障碍患儿与正常儿童间血清中蛋白表达的差异性，也为儿童抽动障碍提供了新的研究思路及方法，同时为不同中医证型间的生物学方面研究提供了新方法，更为其他疾病的蛋白组学研究提供了实验思路。
研究方法：1.将课题组前期通过MB-WCX结合MALDI-TOF-MS技术筛选出的2个(Mr：6642.04、873.73)关于脾虚痰聚证和气郁化火证抽动障碍患儿间以及8个（Mr：6643.34、6642.05、2293.11、2277.19、2192.84、2175.98、1869.76、863.13）关于抽动障碍患儿与健康儿童间的相关差异蛋白作为目标蛋白或肽段，使用高效液相色谱(HPLC)对60例抽动障碍患儿及30例健康对照儿童的磁珠提取液进行分离纯化，并应用液相色谱-串联质谱（LC-MS／MS）技术进行质谱分析，再用Mascot合并ProteomeDiscover2.0软件，检索质谱分析所得的原始数据并与uniprot_human_fasta数据库进行连接、比对数据及匹配寻找相应的差异性蛋白质。2.使用酶联免疫吸附测定(ELISA)分别对脾虚痰聚证与气郁化火证抽动障碍患儿间及抽动障碍患儿与健康对照儿童间的相关差异蛋白进行蛋白质定量分析。
研究结果:1.经质谱鉴定分析后得出Mr为1869.76的蛋白质或肽段其序列为K.MAVTFIGNSTAIQELFK.R，蛋白名称为TUBB；Mr为2191.84的蛋白质或肽段其序列为T.SSTSYNRGDSTFESKSYKM*.A，蛋白名称为FGA1；Mr为2175.98的蛋白质或肽段其序列为R.LAPITSDPTEATAVGAVEASFK.C，蛋白名称为PKM2；Mr为2277.19的蛋白质或肽段其序列为K.WGDAGAEYVVESTGVFTTMEK.A，蛋白名称为GAPDH；Mr为863.13的蛋白质或肽段其序列为R.LGEYDLR.R，蛋白名称为PROC；Mr为873.73的蛋白质或肽段其序列为R.EIFNMA.R，蛋白名称为APOB；Mr为6643.34、6642.05、6642.04、2293.11的蛋白质或肽段在质谱鉴定过程中，未找到与其匹配的相关蛋白。2.通过ELISA对脾虚痰聚证与气郁化火证儿童抽动障碍患儿血清中的APOB蛋白质进行定量分析，得到APOB在儿童抽动障碍脾虚痰聚证中高表达，在儿童抽动障碍气郁化火证中低表达；对儿童抽动障碍组和健康对照组血清中的TUBB、FGA1、PKM2、GAPDH、PROC等蛋白质进行定量分析，得到TUBB、FGA1、PKM2、GAPDH、PROC等蛋白质均在儿童抽动障碍组中低表达，在健康对照组中高表达。
研究结论及意义：通过对课题组前期筛选出的10个相关差异蛋白进行鉴定与验证得出：APOB在抽动障碍儿童脾虚痰聚证与气郁化火证中差异表达，该蛋白可能为区分这两种中医证型的血清特异性蛋白质；FGA1、PKM2在抽动障碍患儿与健康对照儿童血清中差异表达，这两种蛋白有可能为儿童抽动障碍患儿的血特异性蛋白质；TUBB在TD组中低表达，在健康对照组高表达，但与前期结果不一致；GAPDH、PROC在TD组中低表达，在健康对照组高表达，但表达无统计学意义；Mr为6643.34、6642.05、6642.04、2293.11的蛋白质或肽段在质谱鉴定过程中，未找到与其匹配的相关蛋白。通过本课题的研究，不仅得到了脾虚痰聚证与气郁化火证抽动障碍患儿间以及儿童抽动障碍患儿与正常儿童间血清中蛋白表达的差异性，也为儿童抽动障碍提供了新的研究思路及方法，同时为不同中医证型间的生物学方面研究提供了新方法，更为其他疾病的蛋白组学研究提供了实验思路。