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鱼类T淋巴细胞标志基因是鱼类免疫学研究中一个备受关注的问题。通过同源克隆与RACE相结合的方法,获得了鲤(Cyprinus carpio L.)CD8α基因的全长cDNA序列。根据本实验室已获得的CD3γ/δ、CD4L-1、CD8α和CD8β的基因序列设计反义RNA探针,应用原位杂交技术检测了CD3γ/δ、CD8α、CD8β和CD4L-1表达细胞在鲤胸腺、头肾、体肾和脾脏中的分布特征。CD3γ/δ、CD8α、CD8β和CD4L-1表达细胞在鲤胸腺的淋巴样外区呈点状密集分布,而在上皮样内区分布较少且分散;在头肾、体肾和脾脏组织中分散分布,在血管周围呈现不同程度的聚集分布。
通过同源克隆与RACE相结合的方法,获得鲤T-bet、GATA-3、HCK和LCK基因的全长cDNA序列;通过反向PCR的方法,获得鲤T-bet和GATA-3基因的启动子序列。
RT-PCR分析显示在6、18月龄鲤相关组织中均检测到TCRγ、CD3γ/δ、LCK和HCK基因的转录产物,其中以胸腺、鳃和脾脏表达较强;在18月龄鲤相关组织中均检测到T-bet和GATA-3基因的转录产物,其中以胸腺和脾脏表达较强。T-bet、GATA-3和HCK基因主要在转GH基因鲤胸腺、脾脏和头肾组织上调表达,而LCK和CD8α基因主要在转GH基因鲤胸腺组织上调表达,进一步表明转GH基因对鲤T细胞发育的促进作用。
通过RQ-PCR检测,发现在鲤春病毒(SVCV)感染条件下,LCK、HCK、T-bet、GATA-3和CD8α基因在鲤胸腺、头肾、脾脏、鳃、肠和皮肤中呈现动态表达变化。其中在胸腺以表达下降为主,头肾和脾脏在感染早期以上调表达为主;在3-7天,鳃和肠以上调表达为主;表明T细胞系统在鱼类抗病毒免疫中发挥非常活跃的作用。而在小瓜虫(Ichthyophthirius multifiliis)感染条件下,LCK、HCK、T-bet、GATA-3和CD8α基因在1-3天鲤胸腺和头肾以上调表达为主;HCK、GATA-3基因在3-4天皮肤以上调表达为主;提示T细胞系统与鱼类抗寄生虫免疫密切相关。