副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)是革兰氏阴性嗜盐菌,广泛分布在气候条件温暖的海洋、河口环境中。当人食用感染该菌的生的或未煮熟的海产品时,会引发急性肠胃炎、伤口感染,严重者会导致败血症。在副溶血弧菌细胞外内膜之间的周质空间(periplasm)中含有二硫键氧化还原Dsb A蛋白(disulfifide bond formation protein A),该蛋白在周质空间中能催化带有半胱氨酸残基的底物蛋白形成二硫键,从而使底物蛋白能够折叠形成正确的空间构象并获得功能。副溶血弧菌有两dsb A基因,分为位于I号和II号染色体,被命名为Vpdsb A1(VP3054)、Vpdsb A2(VPA1271)。研究发现Dsb家族与细菌的致病性密切相关,但在副溶血弧菌中,Vp Dsb A是否与细菌的致病性相关?若相关,则是通过怎样的分子机制影响其致病性呢?为了检测副溶血弧菌Vp Dsb A是否对细菌致病性有影响,本研究分别利用斑马鱼、小鼠和果蝇等三种动物模型,比较副溶血弧菌的dsb A基因缺失突变株与野生型菌株在这三种动物中的致死率。结果发现,相较于野生型菌株,缺失dsb As的副溶血弧菌突变株在这三种动物模型中的致死率都显著降低,这说明副溶血弧菌Dsb A蛋白对于副溶血弧菌的致病性具有重要作用。那么,Dsb A是如何影响副溶血弧菌的致病性呢?为了解答这个问题,将进一步探究Dsb A蛋白对副溶血弧菌致病因子功能的影响。鞭毛作为众多细菌最主要的运动器官,在生物性状和致病性方面都有重要意义,而细菌运动性主要靠鞭毛的旋转驱动,鞭毛有利于细菌游动和群聚运动。通过研究Vp Dsb A对副溶血弧菌运动性影响发现,Vp Dsb A不影响副溶血弧菌在液体环境的游动,但是影响了在固体表面的群集。Ⅲ型分泌系统(T3SS)作为副溶血弧菌重要的毒力因子,通过感染Hela细胞发现,Dsb As可以通过T3SS1影响其细胞毒性,为了进一步研究Vp Dsb A如何通过T3SS1影响细胞毒性,对T3SS1主要调控因子和效应蛋白进行转录和蛋白水平的分析,利用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹技术(Western Blot)分析发现,Vp Dsb A对T3SS1的效应蛋白和调控因子在转录水平没有显著作用,但Vp Dsb A可增强T3SS1效应蛋白VPA0450,却对T3SS1另外一个效应蛋白VP1683的蛋白水平具有负调控作用。因此,Vp Dsb A可能通过影响T3SS1效应蛋白VPA0450和VP1683的蛋白水平,进而影响副溶血弧菌的细胞毒性。本研究还发现,Vp Dsb A可通过影响溶血素TDH蛋白的表达进而影响其溶血活性。此外,副溶血弧菌对宿主细胞的黏附性与其致病性也密切相关,利用副溶血弧菌dsb A缺失突变株与人源小肠上皮细胞(Caco-2细胞)进行黏附性试验,结果发现,ΔVpdsb A1、ΔVpdsb A2、ΔVpdsb A1/2突变株与宿主细胞的黏附率较野生型菌株均显著降低,回补dsb A后其黏附性得到恢复。这说明Vp Dsb A可以通过影响副溶血弧菌对宿主细胞的黏附作用进而影响其致病性。通过对副溶血弧菌多种黏附因子如Vpad F、MAM7、Pil A、Msh A进行了基因转录和翻译水平的分析发现,在dsb A1/2双缺失突变株(ΔVpdsb A1/2)中,Vpad F蛋白的表达显著降低,这说明Vp Dsb A可通过影响黏附因子Vpad F蛋白的表达进而影响副溶血弧菌与宿主细胞的黏附能力。综上所述,Vp Dsb A通过影响副溶血弧菌的细菌群集性、细胞毒性、溶血性以及对宿主细胞的黏附作用等生理功能,从各方面对副溶血弧菌的致病作用进行调控。本论文阐明了副溶血弧菌Dsb A蛋白影响副溶血弧菌致病作用的分子机制,为进一步认识副溶血弧菌的致病机制提供了重要的理论依据。