论文部分内容阅读
目的:本研究通过探讨粪菌移植对D-半乳糖诱导的衰老大鼠模型的体重、抗氧化酶的活力、小肠的组织形态结构和肠道菌群的影响,明确粪菌移植抗氧化的作用,并初步阐述抗氧化作用的机制,为后期粪菌移植在临床上的抗氧化、抗衰老的应用提供实验基础。方法:将24只健康清洁级SD大鼠随机分为4组,即粪菌组、六味地黄丸组、模型空白组、空白组,每组6只。除空白组外其余大鼠全部按照注射剂量100mg/(kg·d)予以腹腔注射D-半乳糖溶液造模,空白组腹腔注射等体积的生理盐水,期间每周称重一次,持续8周,以建立大鼠衰老模型。造模同时,实验各组分别予以对应的药物进行干预,以粪菌组与其他三组对比治疗,实验期间观察大鼠饮食、活动、精神状态大便等一般情况,实验结束后测定大鼠血清中NO、NOS的含量,肝脏、肾脏组织中SOD、MDA的活性,观测大鼠小肠病理切片,并对4组大鼠粪便样本进行16s RNA测序。结果:1.四组大鼠的一般情况:粪菌组、六味地黄丸组、模型空白组大鼠造模一周后,开始出现毛色发黄伴少量脱毛,进食量较前减少,对食物反应明显迟钝,大便稀溏,行动缓慢,症状体征与自然衰老的大鼠相似。在实验进行的前两周,四组大鼠之间的体重差异不明显。在实验的第3周,模型空白组的体重明显低于空白组,且差异显著(P<0.01)。从第4周开始,模型空白组的体重明显低于粪菌组、六味地黄丸组与空白组,且各组之间的体重差异显著(P<0.01)。从第6周开始,粪菌组体重高于六味地黄丸组。第7周开始,粪菌组与六味地黄丸组之间的差异极显著(P<0.01)。实验的第8周,空白组大鼠的体重明显大于模型空白组,差异有统计学意义(P<0.05)。2.对四组大鼠血清中NO含量、NOS活力检测结果显示:(1)模型空白组较空白组大鼠血清中NO含量明显升高,差异极显著(P<0.01)。其余各组之间大鼠血清中NO含量差异不明显,不具有统计学意义(P>0.05)。(2)模型空白组大鼠血清中NOS活力较粪菌组、六味地黄丸组、空白组均明显升高,差异极显著(P<0.01)。其余各组之间大鼠血清中NOS含量差异不明显,不具有统计学意义(P>0.05)。3.对四组大鼠肝脏与肾脏中SOD、MDA含量检测结果显示:(1)粪菌组、空白组较模型空白组肝脏组织中SOD活性明显升高,差异显著(P<0.05);空白组较粪菌组、六味地黄丸组、模型空白组肝脏组织中SOD活性均明显升高,差异显著(P<0.05)。其余各组之间大鼠肝脏组织中SOD活性差异不明显,不具有统计学意义(P>0.05)。(2)粪菌组、空白组较模型空白组大鼠肾脏组织中SOD活性均明显升高,差异显著(P<0.05)。空白组较粪菌组、六味地黄丸组、模型空白组大鼠肾脏组织中SOD活性均明显升高,差异显著(P<0.05)。其余各组之间大鼠肾脏组织中SOD活性差异不明显,不具有统计学意义(P>0.05)。(3)空白组大鼠肝脏组织中MDA含量较模型空白组明显降低,差异显著(P<0.05)。其余各组之间大鼠肝脏匀浆中MDA含量均无明显差异(P>0.05)。(4)模型空白组较粪菌组、六味地黄丸组、空白组大鼠肾脏组织中MDA含量均明显升高,差异极显著(P<0.01)。其余各组之间大鼠肾脏匀浆中MDA含量均无明显差异(P>0.05)。4.对四组大鼠小肠病理切片观测结果显示:粪菌组十二指肠绒毛均匀细长,排列整齐,结构完整。六味地黄丸组小肠绒毛宽度增加,长度变短,排列稀疏,各小肠上皮细胞间排列不整齐,间质萎缩。模型空白组的小肠绒毛断裂明显,各绒毛间界限不清晰,排列杂乱,在上皮细胞周围可见大量炎性细胞浸润。空白组大鼠小肠绒毛均匀细长、结构完整、排列整齐,绒毛之间界限清晰可见,符合正常的小肠表现。5.对四组大鼠肠道菌群16s RNA检测结果显示:(1)在门水平上,粪菌组的厚壁菌门相对丰度>75%,占比远高于其他菌门;六味地黄丸组的放线菌门相对丰度明显大于其他三组。四组大鼠肠道菌群在纲水平上差异不明显。六味地黄丸组在目水平的菌群种类较其他三组丰富,其余各组之间在目水平上的差异不明显。四组的肠道菌群在科水平上物种丰富,粪菌组中的乳酸杆菌科明显高于其他三组,六味地黄丸组的粪便样本在瘤胃球菌科明显高于其他三组。在属水平上,粪菌组与模型空白组粪便样本中的乳酸杆菌属和普雷沃氏菌属丰度均>75%,明显高于其余两组。(2)对肠道菌群Alpha多样性分析结果显示,粪菌组的进化多样性指数高于模型空白组,差异显著(P<0.05)。粪菌组大鼠的肠道菌群丰度高于模型空白组。(3)粪菌组共检出OTU1488个,与六味地黄丸组、模型空白组、空白组的共有OTU分别为417个、463个、439个,分别占总OUT比例的28.02%、31.12%和29.50%。(4)物种组成分析显示,粪菌组中,乳酸菌属、奈瑟菌属、链球菌属、盐孢菌属、梭菌属、巨单胞菌属、罕见小球菌属、瘤胃球菌属等八类菌属的丰度较其他样本高,而该组中的凝结芽孢杆菌属、脱硫弧菌属、安德克氏菌属和费克蓝姆菌属的丰度较其他样本低。结论:粪菌移植可以提高D-半乳糖诱导的衰老模型大鼠的体重,提升模型大鼠肝、肾组织中的SOD活性,降低MDA含量,增强肝肾组织的抗氧化、抗衰老能力。粪菌移植还能够改善模型大鼠肠道菌群的结构,提高优势菌种的比例,保护肠道功能,维持肠道免疫屏障,从而达到延缓衰老的目的,为今后粪菌移植在抗衰老方面的临床应用提供了实验依据。