论文部分内容阅读
目的:本实验通过研究野生型和polyQ扩展突变型ataxin-3蛋白在细胞内的亚细胞定位及ataxin-3蛋白的polyQ扩展突变对线粒体、高尔基体和内质网形态的影响，以期更深入地了解ataxin-3的生物学功能及突变型ataxin-3蛋白的可能毒性作用机制。 方法:用Lipofectamine2000脂质体将GFP-ataxin-3融合蛋白表达载体pEGFP-N1-MJD20Q/68Q转染入Hela细胞。转染24小时后采用间接免疫荧光法用红色荧光染料分别标记识别线粒体、高尔基体和内质网膜的标记蛋白TOM20、GM130、calnexin。在激光共聚焦显微镜下观察ataxin-3蛋白是否与各细胞器共定位及ataxin-3蛋白的polyQ扩展突变对线粒体、高尔基体和内质网形态的影响。 结果: 1.ataxin-3蛋白与线粒体标记蛋白TOM20无共定位，但表达polyQ扩展型ataxin-3组线粒体碎裂细胞百分比增加(P＜0.05)。 2.ataxin-3蛋白与高尔基体标记蛋白GM130无共定位信号且扩展突变型ataxin-3也不引起高尔基体碎裂。 3.野生型和polyQ扩展型ataxin-3与内质网标记蛋白calnexin均有部分共定位;扩展突变型ataxin-3与calnexin重叠信号较多，且重叠信号大多位于聚集体所在处。 结论: 1.polyQ扩展型ataxin-3蛋白可能间接损害线粒体完整性参与SCA3/MJD致病。 2.polyQ扩展型ataxin-3可能并不影响高尔基体的结构和功能。 3.内质网可能是扩展型ataxin-3蛋白在细胞核外发挥毒性作用的场所。