芋螺毒素主要来自于印度洋和太平洋热带海域中的肉食性腹足纲软体动物芋螺分泌的毒液中,是一类由7-40个氨基酸残基组成的活性多肽,富含半胱氨酸,具有保守的二硫键骨架结构。芋螺毒素选择性的作用于各种神经递质、离子通道以及激肽类受体,可以作为离子通道和膜受体研究的工具。由于具有开发成为药物或药物先导化合物的潜力,因此,芋螺毒素已成为神经生物学、生物化学、药理学、药物化学甚至军事部门的研究热点。自从1978年Cruz等人从地纹芋螺的毒液中分离出第一种芋螺毒素,至今已有百余种芋螺毒素被分离和鉴定。但是,芋螺的采集和毒素的提取、分离、纯化等步骤费时费力,产率较低,并且受资源的影响较大,况且有些标本很难获取。随着生物技术的不断发展,用基因工程手段获取各种芋螺毒素成为今后研究的方向。构建cDNA文库发现新型芋螺毒素基因的方法,在一定程度上解决了芋螺材料来源的问题,也为新型芋螺毒素的研究开发提供了便利条件。利用SMART技术构建疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库。提取疣缟芋螺毒管总RNA,用逆转录酶链式反应(RT-PCR)反转录成cDNA第1链(ss-cDNA),长距离PCR(Long-distance, LD PCR)扩增合成cDNA第2链(ds-cDNA),依次用蛋白酶K和Sfi I酶进行酶切孵育,用CHROMA SPIN-400柱子进行分级分离。得到的ds-cDNA与λTripIE×2噬菌体载体体外连接并体外包装,感染大肠杆菌E.coli XL1-blue,测定原始文库滴度和重组率。文库扩增,测定扩增文库滴度。PCR鉴定插入cDNA片段大小。构建的疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体原始文库滴度为1.47x106pfu/ml,重组率为90.72%,扩增文库的滴度为4.07x108pfu/ml,插入cDNA片段大小为200～1200bp。利用SMART技术成功构建了疣缟芋螺毒管cDNA噬菌体文库,为芋螺基因的筛选和鉴定奠定了基础。虽然以噬菌体载体构建的cDNA文库具有质量高、容量大、代表性好、适合长期保存等优点,但噬菌斑铺平板进行培养的工作费时费力,效率低,且可采用的筛选基因的方法有限。根据λTripIE×2噬菌体能利用宿主菌E.coli BM25.8内已表达的重组酶自身环化成质粒pTripIE×2的原理,把原始噬菌体文库菌液转导入E.coli BM25.8宿主菌中将cDNA噬菌体文库转化为cDNA质粒文库,实现了质粒文库中基因的简单有效筛选,突破了噬菌体文库筛选的局限性,在新型基因大量筛选方面具有广阔前景。