论文部分内容阅读
目的 探讨温热疗法能否增加前药5-FC对转CD基因结肠癌细胞的靶向性杀伤作用及作用机制。 方法 脂质体法将含CD基因的逆转录病毒载体GlCEACDNa直接转染大肠癌SW480细胞,PCR分析目的基因整合,RT-PCR方法检测目的基因表达;将转染GlCEACDNa之SW480细胞及未转基因之SW480细胞接种到96孔细胞培养板中,接种同时加入含各种梯度浓度的前药5-FC,热疗组分别于加入5-FC的同时在43℃下热疗30min,对照组不热疗,第8 d去除培养液,以MTT法测定活细胞比率并计算杀伤率,分析前药热疗对转基因肿瘤细胞的杀伤作用。此外,分别于加入5-FC的同时在41℃、42℃、43℃、44℃、45℃、60’C下热疗30min,以及在加入5-FC的同时在43℃下热疗10min、20min、30min、40min、50min、1h,以探讨前药5-FC的最适温度与时间。流式细胞术分析热化疗对肿瘤细胞周期的影响,透射电镜观测热化疗前后肿瘤细胞结构的改变。 结果 脂质体法成功将GlCEACDNa转染入大肠癌SW480细胞,PCR检测表明目的基因整合到靶细胞中,RT-PCR检测表明热疗对目的基因在肿瘤细胞的表达无明显影响;未转基因热疗组与对照组相比,细胞存活率明显降低po0刀1,t一6.994,n =9),转CD基因之 SW480细胞对 5FC的敏感性明显提高卜0.01,t一.4983 n一卜转基因热疗组与转基因对照组比较,5FC对细胞的杀伤率明显增加po0刀5,t d.403,n叫卜 在各组中,以转基因热疗组杀细胞作用最强。细胞的杀伤率与转基因细胞的比例并不一致,当转基因细胞达到 30%时,对混合细胞的杀伤率为 53.l%,与 100%转基因细胞的杀伤率(59.5%)相似;在热疗组,当转基因细胞达到30%时,对混合细胞的杀伤率为55.5%,当转基因细胞达到50%时,对混合细胞的杀伤率为79.5%,与100%转基因细胞的杀伤率(83.2%)相似。转基因细胞在 5FC 43oC热化疗 30 min,基本达到最佳杀细胞效果卜0刀5,trw=2.260,n—9:P<0*5,t删一2二 79,n =9),再增加温度及作用时间,对肿瘤细胞的杀伤作用未见明显增大。流式细胞术检测结果显示前药治疗组与热化疗组 S期细胞比例明显增多沪功.005,t习.4189 n =6; P<0.001,t刁.158,n畸),提示热化疗使肿瘤细胞产生 S期阻滞;透视电镜检测细胞结构的改变,热化疗组可见细胞表现为细胞膜微绒毛消失,边缘变平直,细胞核皱缩,染色质聚集在核模下。结论 1 前药5一FC热化疗,能明显提高转CD基因大肠癌细胞SW480对前药的敏感性; 2 本实验提示,前药5—FC在43oC下热疗30 min,基本达到最大的杀细胞效果; 3 本实验提示,热化疗使SW480细胞产生S期阻滞,从而促进细胞凋亡。