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目的:探讨小柴胡汤加减方对慢性胰腺炎大鼠模型胰腺外分泌功能和大鼠胰腺腺泡细胞分泌功能的影响及其作用机制。
方法:(1)采用一次性尾静脉注射DBTC(7ml/kg)的方法制备慢性胰腺炎大鼠模型,治疗组给予小柴胡汤加减方灌胃(2ml/只),模型组以相同方式给予相同剂量的生理盐水灌胃。连续灌胃28天,记录大鼠体重变化,胆胰管逆行插管收集2h大鼠胆胰液,收集大鼠胰腺组织。采用碘-淀粉比色法测定胆胰液中淀粉酶活力,酶比色法测定胆胰液中脂肪酶活力,BCA蛋白浓度测定法测定胆胰液中总蛋白含量,比色法测定胆胰液中Ca2+浓度,HE染色和Masson染色观察胰腺组织病理变化。通过RT-PCR法和Western-blot法检测胰腺组织IP3-DAG-Ca2+信号通路中PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达情况。(2)采用大鼠灌胃的方法制备含小柴胡汤加减方中药血清。采用胶原酶I消化离体大鼠胰腺组织的方法分离腺泡细胞。将大鼠腺泡细胞与中药血清共同孵育10min,收集细胞沉淀和细胞培养液上清。采用碘-淀粉比色法测定培养液上清淀粉酶活力,酶比色法测定培养液上清脂肪酶活力,BCA蛋白浓度测定法测定细胞培养液上清总蛋白含量,比色法测定细胞培养液上清中Ca2+浓度。通过RT-PCR法和Western-blot法检测大鼠腺泡细胞IP3-DAG-Ca2+信号通路中PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达情况。
结果:(1)实验第7天、第14天、第21天、第28天,三组大鼠体重具有统计学意义(P<0.05)。实验第1天至第14天,模型组大鼠体重增长值(91.13±16.70)g和治疗组大鼠体重增长值(91.88±13.84)g均比对照组大鼠体重增长值(118.50±12.76)g低(P<0.05);实验第14天至第28天,治疗组大鼠体重增长值(91.25±11.65)比对照组大鼠体重增长值(76.00±7.75)g和模型组大鼠体重增长值(78.50±10.04)g高(P<0.05)。模型组大鼠胆胰液淀粉酶活力(34310.74±5939.48)U/dl和治疗组大鼠胆胰液淀粉酶活力(35888.41±2119.33)U/dl比对照组大鼠胆胰液淀粉酶活力(53353.26±11456.59)U/dl低(P<0.05)。模型组大鼠胆胰液脂肪酶活力(245.60±30.48)U/L比对照组大鼠胆胰液脂肪酶活力(293.20±48.96)U/L低(P<0.05);治疗组大鼠胆胰液脂肪酶活力(296.50±39.44)U/L比模型组大鼠胆胰液脂肪酶活力高(P<0.05)。模型组大鼠胆胰液总蛋白含量(5957.19±1428.08)ug/ml比对照组大鼠胆胰液总蛋白含量(8170.40±1261.06)ug/ml低(P<0.05);治疗组大鼠胆胰液总蛋白含量(10928.24±1281.24)ug/ml比模型组大鼠胆胰液总蛋白含量高(P<0.05)。模型组大鼠胆胰液Ca2+浓度(6.06±0.61)mg/dl比对照组胆胰液Ca2+浓度(11.44±1.37)mg/dl降低(P<0.05);治疗组大鼠胆胰液Ca2+浓度(8.55±0.56)mg/dl比模型组大鼠胆胰液Ca2+浓度高(P<0.05)。模型组大鼠胰腺组织PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达比对照组低(P<0.05),治疗组大鼠胰腺组织PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达比模型组高(P<0.05)。(2)中药组细胞培养液上清淀粉酶活力(15191.58±3005.06)U/dl比对照组细胞培养液上清淀粉酶活力(8979.09±1717.85)U/dl高(P=0.001)。中药组细胞培养液上清脂肪酶活力(291.87±45.27)U/L比对照组细胞培养液上清脂肪酶活力(193.26±28.22)U/L高(P=0.001)。中药组细胞培养液上清总蛋白含量(8177.43±1126.42)ug/ml比对照组细胞培养液上清总蛋白含量(5302.40±838.30)ug/ml高(P=0.002)。中药组细胞培养液上清Ca2+浓度(1.54±0.16)mg/dl升高比对照组细胞培养液上清Ca2+浓度(1.23±0.22)mg/dl高(P=0.019)。中药组腺泡细胞PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达高于对照组(P<0.05)。
结论:(1)小柴胡汤加减方可以促进腺泡细胞分泌功能,改善慢性胰腺炎大鼠的胰腺外分泌功能。(2)小柴胡汤加减方可通过调节IP3-DAG-Ca2+信号通路,提高PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达,改善胰腺外分泌功能。
方法:(1)采用一次性尾静脉注射DBTC(7ml/kg)的方法制备慢性胰腺炎大鼠模型,治疗组给予小柴胡汤加减方灌胃(2ml/只),模型组以相同方式给予相同剂量的生理盐水灌胃。连续灌胃28天,记录大鼠体重变化,胆胰管逆行插管收集2h大鼠胆胰液,收集大鼠胰腺组织。采用碘-淀粉比色法测定胆胰液中淀粉酶活力,酶比色法测定胆胰液中脂肪酶活力,BCA蛋白浓度测定法测定胆胰液中总蛋白含量,比色法测定胆胰液中Ca2+浓度,HE染色和Masson染色观察胰腺组织病理变化。通过RT-PCR法和Western-blot法检测胰腺组织IP3-DAG-Ca2+信号通路中PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达情况。(2)采用大鼠灌胃的方法制备含小柴胡汤加减方中药血清。采用胶原酶I消化离体大鼠胰腺组织的方法分离腺泡细胞。将大鼠腺泡细胞与中药血清共同孵育10min,收集细胞沉淀和细胞培养液上清。采用碘-淀粉比色法测定培养液上清淀粉酶活力,酶比色法测定培养液上清脂肪酶活力,BCA蛋白浓度测定法测定细胞培养液上清总蛋白含量,比色法测定细胞培养液上清中Ca2+浓度。通过RT-PCR法和Western-blot法检测大鼠腺泡细胞IP3-DAG-Ca2+信号通路中PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达情况。
结果:(1)实验第7天、第14天、第21天、第28天,三组大鼠体重具有统计学意义(P<0.05)。实验第1天至第14天,模型组大鼠体重增长值(91.13±16.70)g和治疗组大鼠体重增长值(91.88±13.84)g均比对照组大鼠体重增长值(118.50±12.76)g低(P<0.05);实验第14天至第28天,治疗组大鼠体重增长值(91.25±11.65)比对照组大鼠体重增长值(76.00±7.75)g和模型组大鼠体重增长值(78.50±10.04)g高(P<0.05)。模型组大鼠胆胰液淀粉酶活力(34310.74±5939.48)U/dl和治疗组大鼠胆胰液淀粉酶活力(35888.41±2119.33)U/dl比对照组大鼠胆胰液淀粉酶活力(53353.26±11456.59)U/dl低(P<0.05)。模型组大鼠胆胰液脂肪酶活力(245.60±30.48)U/L比对照组大鼠胆胰液脂肪酶活力(293.20±48.96)U/L低(P<0.05);治疗组大鼠胆胰液脂肪酶活力(296.50±39.44)U/L比模型组大鼠胆胰液脂肪酶活力高(P<0.05)。模型组大鼠胆胰液总蛋白含量(5957.19±1428.08)ug/ml比对照组大鼠胆胰液总蛋白含量(8170.40±1261.06)ug/ml低(P<0.05);治疗组大鼠胆胰液总蛋白含量(10928.24±1281.24)ug/ml比模型组大鼠胆胰液总蛋白含量高(P<0.05)。模型组大鼠胆胰液Ca2+浓度(6.06±0.61)mg/dl比对照组胆胰液Ca2+浓度(11.44±1.37)mg/dl降低(P<0.05);治疗组大鼠胆胰液Ca2+浓度(8.55±0.56)mg/dl比模型组大鼠胆胰液Ca2+浓度高(P<0.05)。模型组大鼠胰腺组织PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达比对照组低(P<0.05),治疗组大鼠胰腺组织PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达比模型组高(P<0.05)。(2)中药组细胞培养液上清淀粉酶活力(15191.58±3005.06)U/dl比对照组细胞培养液上清淀粉酶活力(8979.09±1717.85)U/dl高(P=0.001)。中药组细胞培养液上清脂肪酶活力(291.87±45.27)U/L比对照组细胞培养液上清脂肪酶活力(193.26±28.22)U/L高(P=0.001)。中药组细胞培养液上清总蛋白含量(8177.43±1126.42)ug/ml比对照组细胞培养液上清总蛋白含量(5302.40±838.30)ug/ml高(P=0.002)。中药组细胞培养液上清Ca2+浓度(1.54±0.16)mg/dl升高比对照组细胞培养液上清Ca2+浓度(1.23±0.22)mg/dl高(P=0.019)。中药组腺泡细胞PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达高于对照组(P<0.05)。
结论:(1)小柴胡汤加减方可以促进腺泡细胞分泌功能,改善慢性胰腺炎大鼠的胰腺外分泌功能。(2)小柴胡汤加减方可通过调节IP3-DAG-Ca2+信号通路,提高PLCβ3、IP3R1、PKCδ和CaMK2δ的mRNA和蛋白表达,改善胰腺外分泌功能。