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目的:肾缺血再灌注损伤是泌尿外科临床常见的病理生理过程,在重症感染、严重创伤、一些外科手术如保留肾单位肾部分切除术、肾移植术等中,常发生肾脏缺血再灌注损伤,因此,如何预防及减轻肾缺血再灌注损伤是临床医生的工作重点。近几年经过大量动物实验,证实脉络宁对多种器官的缺血再灌注损伤均具有保护作用。本研究拟在体内探讨脉络宁对肾脏缺血再灌注损伤的保护作用及其相关机制,对该药进一步的临床应用提供理论依据,在新药开发和临床验证中提供必要的实验支持,力求为中医药预防和保护肾脏缺血再灌注损伤提供新的思路与方法。
方法:1.随机分为三组(n=15):假手术组(A组);缺血再灌注组(B组);脉络宁治疗组(C组)。2.模型制备:SD大鼠适应性饲养1周后,术前禁食12h,不禁水,体重(230±20)g,所有大鼠经腹腔注射7%水合氯醛溶液(5ml·kg-1)进行麻醉。麻醉成功后将大鼠固定于手术架,常规消毒,取腹部正中切口,游离双侧肾脏,三组大鼠均切除右侧肾脏,只保留左侧肾脏,C组从尾静脉注射脉络宁注射液(4ml·kg-1),5min后用无创动脉夹夹闭左侧肾蒂,用无菌湿纱块覆盖切口,注意保温,45min后去除动脉夹,观察肾脏颜色由暗红色变为鲜红色,说明肾脏缺血再灌注损伤模型制备成功,逐层缝合切口;A组从尾静脉注射NS(4ml·kg-1),但不夹闭左侧肾蒂,同样用无菌纱湿块覆盖切口,待45min后逐层缝合,为假手术组。B组用NS代替脉络宁注射液,其余操作同C组;C组于术后每8h给予尾静脉注射脉络宁(4ml·kg-1)各一次,共3次;A、B两组用NS代替脉络宁注射液,给药方式同C组。术后24h腹主动脉采血、并切除左侧肾脏固定于4%多聚甲醛溶液中备检并处死大鼠。5.观察指标:血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血浆超氧化物歧化酶(SOD)、血清丙二醛(MDA)、抗细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、促细胞凋亡蛋白(Bax)及光镜观察:所有标本均进行HE常规染色与免疫组化。
结果:1.光学显微镜组织切片显示:①假手术组:在光镜下肾小管上皮细胞无明显变化,偶见肾小球肿大,少量炎细胞浸润。②缺血再灌注组在光镜下可见肾小管上皮细胞变性坏死,肾小管萎缩、变性或坏死、脱落,管型,间质内大量炎细胞浸润等病理改变。③脉络宁治疗组:在光镜下可见肾小管水肿样变性,少量坏死,偶见管型,较缺血再灌注组病理变化显著减轻。2.BUN、Scr检测显示:与假手术组比较,缺血再灌注组和脉络宁治疗组Scr和BUN水平均显著增高(P<0.05),而与缺血再灌注组比较,脉络宁治疗组的Scr和BUN明显著降低(P<0.05)。3.SOD、MDA检测显示:与假手术组比较,缺血再灌注组与脉络宁治疗组SOD显著降低(P<0.05),而脉络宁治疗组的SOD水平与缺血再灌注组比较又有显著升高(P<0.05)。缺血再灌注组和脉络宁治疗组的MDA含量均显著升高,但与缺血再灌注组比较,脉络宁治疗组的MDA含量显著降低(P<0.05)。4.Bcl-2、Bax蛋白含量以及Bcl-2/Bax比值显示:与假手术组比较,缺血再灌注组与脉络宁治疗组的Bcl-2蛋白均有显著升高(P<0.05),而脉络宁治疗组的Bcl-2蛋白含量与缺血再灌注组比较又有显著升高(P<0.05);缺血再灌注组与脉络宁治疗组的Bax蛋白含量均升高,但与缺血再灌注组比较,脉络宁治疗组的Bax蛋白含量显著降低(P<0.05);与缺血再灌注组比较,脉络宁治疗组的Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.05)。
结论:1.缺血再灌注导致大鼠肾组织病理损伤,SOD活性降低,Scr、BUN、MDA含量明显升高。2.脉络宁注射液可以减轻肾组织病理损伤,提高SOD活性,降低Scr、BUN、MDA含量。3.脉络宁注射液可能通过下调调亡相关基因Bax表达,上调Bcl-2基因表达,抑制细胞调亡,从而起到对肾缺血再灌注损伤的保护作用。
方法:1.随机分为三组(n=15):假手术组(A组);缺血再灌注组(B组);脉络宁治疗组(C组)。2.模型制备:SD大鼠适应性饲养1周后,术前禁食12h,不禁水,体重(230±20)g,所有大鼠经腹腔注射7%水合氯醛溶液(5ml·kg-1)进行麻醉。麻醉成功后将大鼠固定于手术架,常规消毒,取腹部正中切口,游离双侧肾脏,三组大鼠均切除右侧肾脏,只保留左侧肾脏,C组从尾静脉注射脉络宁注射液(4ml·kg-1),5min后用无创动脉夹夹闭左侧肾蒂,用无菌湿纱块覆盖切口,注意保温,45min后去除动脉夹,观察肾脏颜色由暗红色变为鲜红色,说明肾脏缺血再灌注损伤模型制备成功,逐层缝合切口;A组从尾静脉注射NS(4ml·kg-1),但不夹闭左侧肾蒂,同样用无菌纱湿块覆盖切口,待45min后逐层缝合,为假手术组。B组用NS代替脉络宁注射液,其余操作同C组;C组于术后每8h给予尾静脉注射脉络宁(4ml·kg-1)各一次,共3次;A、B两组用NS代替脉络宁注射液,给药方式同C组。术后24h腹主动脉采血、并切除左侧肾脏固定于4%多聚甲醛溶液中备检并处死大鼠。5.观察指标:血清尿素氮(BUN)、血肌酐(Scr)、血浆超氧化物歧化酶(SOD)、血清丙二醛(MDA)、抗细胞凋亡蛋白(Bcl-2)、促细胞凋亡蛋白(Bax)及光镜观察:所有标本均进行HE常规染色与免疫组化。
结果:1.光学显微镜组织切片显示:①假手术组:在光镜下肾小管上皮细胞无明显变化,偶见肾小球肿大,少量炎细胞浸润。②缺血再灌注组在光镜下可见肾小管上皮细胞变性坏死,肾小管萎缩、变性或坏死、脱落,管型,间质内大量炎细胞浸润等病理改变。③脉络宁治疗组:在光镜下可见肾小管水肿样变性,少量坏死,偶见管型,较缺血再灌注组病理变化显著减轻。2.BUN、Scr检测显示:与假手术组比较,缺血再灌注组和脉络宁治疗组Scr和BUN水平均显著增高(P<0.05),而与缺血再灌注组比较,脉络宁治疗组的Scr和BUN明显著降低(P<0.05)。3.SOD、MDA检测显示:与假手术组比较,缺血再灌注组与脉络宁治疗组SOD显著降低(P<0.05),而脉络宁治疗组的SOD水平与缺血再灌注组比较又有显著升高(P<0.05)。缺血再灌注组和脉络宁治疗组的MDA含量均显著升高,但与缺血再灌注组比较,脉络宁治疗组的MDA含量显著降低(P<0.05)。4.Bcl-2、Bax蛋白含量以及Bcl-2/Bax比值显示:与假手术组比较,缺血再灌注组与脉络宁治疗组的Bcl-2蛋白均有显著升高(P<0.05),而脉络宁治疗组的Bcl-2蛋白含量与缺血再灌注组比较又有显著升高(P<0.05);缺血再灌注组与脉络宁治疗组的Bax蛋白含量均升高,但与缺血再灌注组比较,脉络宁治疗组的Bax蛋白含量显著降低(P<0.05);与缺血再灌注组比较,脉络宁治疗组的Bcl-2/Bax比值显著升高(P<0.05)。
结论:1.缺血再灌注导致大鼠肾组织病理损伤,SOD活性降低,Scr、BUN、MDA含量明显升高。2.脉络宁注射液可以减轻肾组织病理损伤,提高SOD活性,降低Scr、BUN、MDA含量。3.脉络宁注射液可能通过下调调亡相关基因Bax表达,上调Bcl-2基因表达,抑制细胞调亡,从而起到对肾缺血再灌注损伤的保护作用。