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周围神经损伤常引起病理性疼痛,表现为痛超敏,即痛阈显著下降;痛敏,即痛反应增强和自发性疼痛。多年来,尽管国内外已经进行了大量研究,但病理性疼痛的机制仍然不清楚。过去一直认为周围神经损伤后,感觉纤维在病理性疼痛的产生过程发挥关键作用。但近年来的研究发现神经损伤后病理性疼痛的产生和维持并不依赖于损伤的感觉纤维,邻近未损伤的神经纤维可能发挥了更为重要的作用。最近,有实验发现选择性切除大鼠腰5脊神经前根(lumbar 5 ventral root transection,L5 VRT),而不损伤感觉神经元,也能产生类似于腰5脊神经结扎引起的病理性疼痛。但其机制有待于进一步研究。神经损伤后损伤的纤维将发生Wallerian变性,并进一步引起局部释放大量的细胞因子和神经营养性因子。目前普遍认为,肿瘤坏死因子α(tumor necrosis facctor-alpha,TNF-α)是神经损伤后最先表达的炎症因子[25],它启动其他细胞因子和炎症因子的级联反应。例如,TNF-α能够诱导白细胞介素-6(interleukin-6,IL-6)的分泌[26]。本实验室的研究结果表明TNF-α上调是引起神经病理性疼痛的必要条件,但并不参与其维持。此外,本实验室的近期研究[31]还发现,在不损伤大鼠的外周神经的情况下,在大鼠的坐骨神经周围施以微量的重组大鼠TNF(peri-sciatic administration of rrTNF,PST模型)可通过激发TNF-α的自分泌过程引起DRG神经元TNF-α持续上调和机械痛超敏,抑制核转录因子-kB(nuclear factor-kB,NF-kB)可防止上述现象产生。提示,在神经病理性疼痛的形成机制中,TNF-α等细胞因子的异常上调可能要比神经损伤本身所引起的致痛作用更为重要。但目前几乎没有证据证明IL-6在生理性疼痛中发挥作用,而对于IL-6在病理性疼痛产生过程中的作用,目前仍存有一定争议。本实验采用L5 VRT模型,首先通过免疫荧光组织化学和免疫荧光双染,观察L5 VRT后不同时间DRG IL-6的表达及其组织学定位,然后使用TNF-α合成抑制剂thalidomide,抑制TNF-α的合成,观察IL-6在L5 VRT引起病理性疼痛中的作用。通过这些实验来进一步阐述IL-6在病理性疼痛产生过程中的作用。
第1部分腰5前根切除引起IL-6在大鼠背根神经节和脊髓的表达
以往的实验发现选择性损伤大鼠运动神经纤维而保持初级感觉神经元的完整,也能引起痛觉过敏。TNF-α在神经病理性疼痛的产生过程发挥重要作用。文献有的说IL-6可能参与疼痛的细胞因子之一,但另一方面也说它有抗损伤,对神经起保护作用。于是在IL-6在神经病理性疼痛中究竟起着什么样的作用,目前还不清楚,并且L5 VRT后IL-6在DRG的表达也仍不清楚。于是本实验采用免疫荧光组织化学和免疫荧光双染技术,首次详细、系统观察了L5 VRT后,大鼠DRG内的IL-6免疫活性变化的时间过程和表达的细胞类型,L5脊髓背角的IL-6和IL-6R免疫活性变化。结果发现L5 VRT能引起IL-6在同侧L4、L5 DRG表达增强,L5脊髓背角双侧IL-6及IL-6R表达增强。在DRG,与对照组相比,L5 VRT后1天时IL-6在大鼠同侧L4和L5表达的没有明显变化,3天表达明显增加并达到高峰(P
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