木瓜凝乳蛋白酶(Chymopapain简称CHP)是番木瓜乳汁中的一种半胱氨酸蛋白酶，具有凝乳和蛋白水解能力。它可用于治疗腰椎间盘突出症、Rh血型鉴定、肿瘤的辅助治疗、消炎、细胞分离以及啤酒的澄清和奶酪的制造等。 由于番木瓜乳汁中的几种半胱氨酸蛋白酶具有相似的结构和性质，木瓜凝乳蛋白酶的特异性检测和高纯度分离纯化都存在一定的困难。为了更好地进行木瓜凝乳蛋白酶的检测和分离纯化，本课题用自制的抗原进行了该酶多克隆抗体和单克隆抗体的制备研究，并初步建立了木瓜凝乳蛋白酶免疫学检测方法。 采用Macro-PrepHighSSupport作为层析介质，分别采用pH5.0醋酸钠缓冲溶液和pH9.5硼酸钠缓冲溶液洗脱，纯化两次，分离得到较高纯度的木瓜凝乳蛋白酶。此分离方法易于操作，结果稳定，重现性好。 用纯化的木瓜凝乳蛋白酶免疫新西兰大耳兔，经三次加强免疫后，检测达到理想效价，收集血液，制备抗血清。采用ELISA法对抗血清的效价和特异性进行分析，效价达1：106，抗血清中除了含有木瓜凝乳蛋白酶的抗体外，还含有少量木瓜蛋白酶的抗体。 用纯化的木瓜凝乳蛋白酶免疫BALB/c小鼠，小鼠的血清达到理想效价后，取其脾细胞与预先准备好的骨髓瘤细胞SP2/0在PEG的作用下进行融合，用HAT作为筛选培养基获得阳性克隆。经过3次亚克隆，筛选得到阳性杂交瘤细胞，细胞培养上清效价高于10-3。将一定数量的杂交瘤细胞注入BALB/c小鼠腹腔，一星期左右得效价约为10-6的腹水。 用ProteinASepharoseCL-4B作为纯化介质，pH3.0甘氨酸缓冲溶液作为洗脱液，纯化兔抗血清与小鼠腹水，初步建立了木瓜凝乳蛋白酶免疫学检测方法，与传统酶活检测法比较该法灵敏度高，特异性强，操作简便。 本论文通过制备木瓜凝乳蛋白酶的多克隆抗体和单克隆抗体并初步建立免疫学检测方法，为木瓜凝乳蛋白酶的分离纯化和药代动力学的研究奠定了基础，并可用于番木瓜资源的调查。