家蝇是广布世界的卫生害虫,其防御病原入侵的先天免疫反应独特而有效。酚氧化酶原系统是家蝇重要的体液免疫组分,而酚氧化酶原激活酶（prophenoloxidaseactivating proteinase,PAP）是该系统激活的关键酶。本文利用家蝇转录组学分析筛选出mdPAP1基因的ESTs,通过RACE技术,克隆了该基因全长。生物信息学分析显示,该基因全长为1358 bp,包含一个1122 bp的开放阅读框（open reading frame,ORF）,该基因编码的MdPAP1蛋白其分子量为373个氨基酸。序列比对显示MdPAP1与其它昆虫的PAP1同源性在35%～50%。系统发育树结果显示家蝇MdPAP1与黑腹果蝇Dmeaster同源性最高。通过qRT-PCR技术探究了正常家蝇在各个发育时期中mdPAP1的相对表达量,结果显示mdPAP1基因在家蝇各时期均表达并且在幼虫中表达量最高。为了探究mdPAP1基因的激活功能,采用qRT-PCR技术检测了家蝇幼虫在感染大肠杆菌（Escherichia coli）和金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）后mdPAP1基因的表达水平,结果显示mdPAP1基因在E.coli感染后4 h,mdPAP1基因表达量达到最大,接着开始下降。在S.aureus感染后6 h,mdPAP1基因表达量显著上调,然后下降。由此可以看出该基因被诱导表达,都表现出先升高后下降的趋势。推测mdPAP1基因可能与家蝇酚氧化酶原系统的激活有关。构建mdPAP1/pGEX-3H表达载体进行原核表达,结果显示r MdPAP1为包涵体,大小约为60k Da。通过包涵体变性复性、浓缩得到了可溶性重组蛋白,采用谷胱甘肽琼脂糖亲和色谱柱纯化r MdPAP1蛋白并且利用该蛋白制备了兔多克隆抗体,通过蛋白质印迹法验证了该抗体的成功制备。r MdPAP1用凝血酶消化得到了去GST标签的纯化蛋白（34k Da）,为在体外研究MdPAP1的功能奠定了基础。为了进一步验证mdPAP1基因的功能,在体内通过RNAi技术,探究了家蝇的存活率和酚氧化酶（prophenoloxidase,PO）活性的变化,当mdPAP1基因被沉默时家蝇的存活率低于40%,证实了mdPAP1基因对酚氧化酶原系统的免疫与激活功能。为了进一步研究该纯化蛋白的功能,在体外使蛋白与正常家蝇血淋巴或E.coli孵育,PO活性相比于对照组显著降低,证明r MdPAP1在PPO系统中的激活功能。所有结果显示,mdPAP1基因在家蝇体内和体外均对酚氧化酶原系统有免疫与激活功能。