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闽楠(Phoebe bournei(Hemsl.)Yang)又称楠木,系樟科(Lauraceae)楠属(Phoebe)亚热带常绿阔叶树种,是我国特有种,为国家二级保护植物。本文以贵州省都匀市螺丝壳自然保护区的野生健康闽楠为试验材料,按照春夏秋冬四个季节对闽楠的不同组织部位进行取样,利用组织块分离法分离闽楠内生真菌,结合形态学与r DNA-ITS对其进行鉴定后,对闽楠内生真菌进行多样性分析;同时对内生真菌的生防潜力、促生效果进行评价,筛选出同时具备生防与促生功能的复合性菌株;通过盆栽实验将内生真菌回接至闽楠幼苗,检测其对闽楠生长、生理指标的影响,为闽楠的人工培育及闽楠内生真菌的合理开发利用提供依据。具体研究结果如下:(1)按春夏秋冬四季由健康闽楠根、茎、叶中分离得到389株内生真菌,总分离率为64.83%。按闽楠组织部位统计内生真菌数量显示:根部分离出的菌株数量最多,为186株占总菌株数的47.82%;茎部为128株,占总菌株数的32.90%;叶部数量最少,为75株占总菌株数的19.28%。按春夏秋冬四季统计内生真菌数量显示:春季分离出98株,占总菌株数的25.19%;夏季分离出78株,占总菌株数的20.05%;秋季分离出的菌株数量最多,为156株占总菌株数的40.10%;冬季最少,为57株占总菌株数的14.65%。结合形态学与r DNA-ITS对闽楠内生真菌进行鉴定的结果显示,389株内生真菌归属于2门4纲11目30属,共45个种。其中,子囊菌门Ascomycota为优势菌门,约占88.15%;粪壳菌纲Sordariomycetes为优势纲,占总菌株数的51.67%;间座壳菌目Diaporthales为优势目,占总菌株数的25.97%;闽楠内生真菌的优势属包括间座壳菌属Diaporthe,占总菌株数的17.48%;叶点霉属Phyllosticta,占总菌株数的10.28%。(2)闽楠内生真菌多样性分析显示:不同季节内生真菌的香农指数(H’)、辛普森指数(D)、丰富度指数(M)由高到低顺序为:秋>春>夏>冬;均匀度指数(E)为:春>夏>秋=冬。相似性指数(Cs)分析,秋季与春天内生真菌类群最为相似,Cs=0.97;秋季与冬季之间内生真菌类群差异最大,Cs=0.34。不同组织部位内生真菌的香农指数(H’)、辛普森指数(D)、丰富度指数(M)由高到低的顺序为:根>茎>叶;均匀度指数(E)为:叶>根>茎。相似性指数(Cs)分析显示:根部与茎部内生真菌类群最为相似,Cs=0.82,根部与叶部之间内生真菌类群差异最大,Cs=0.46。(3)生防潜力效果评价显示:以8种植物病原菌为指示菌对闽楠内生真菌进行平皿抑菌活性检测,得到具有抑菌活性的闽楠内生真菌27株,占内生真菌总数的60%。其中菌株3-ye-3、3-ccg-2、3-ccg-1、3-hcg-5、1-cg-18对8株常见植物病原菌均有明显抑制作用,以3-ye-3菌株的抑菌效果最好,对8种病原菌的抑菌范围在25.20%~85.20%;在挥发性代谢产物抑菌实验中,菌株3-ccg-1和3-hcg-5可以通过产生挥发性代谢产物抑制病原菌;在液体代谢产物抑菌实验中菌株1-cg-18、3-ccg-2、3-ye-3的液体代谢产物能抑制病原菌,通过测定其代谢产物的种类发现抑菌主要代谢产物为黄酮类、醛类、酚类和有机酸类。(4)促生效果评价显示:在27株具抑菌活性的内生真菌基础上筛选得到溶磷能力较强的菌株为1-cg-13与1-cg-2,它们溶解Ca3(PO4)2的溶磷率分别为24.51%、21.89%;菌株1-cg-13与3-hcg-5对钾长石粉末存在较快的趋向性生长。27株内生真菌分泌IAA能力测定结果显示,菌株1-cg-18、1-cj-4、4-cg-4、4-hby-3具有较强的分泌IAA能力,其IAA分泌量分别为41.39 ug/ml、40.16 ug/ml、37.68 ug/ml和35.75 ug/ml。(5)选取菌株1-cg-13、1-cg-2、3-hcg-5、1-cg-18、1-cj-4、4-cg-4和4-hby-3共7株同时具备生防和促生功能的内生真菌,通过盆栽实验回接至闽楠幼苗,用于检测内生真菌对闽楠幼苗的生长、生理影响。结果显示:在接种7株内生真菌90d后,通过镜检发现7个实验组的菌丝均已在幼苗根部定殖成功;7个内生真菌均在不同程度上提高了闽楠生长指标、叶绿素、可溶性蛋白、根系活力、SOD活性、POD活性、CAT活性、根际土壤氮磷钾养分、根际土壤酶活性等;其中以菌株1-cg-18对闽楠的促生效果最好,与对照处理相比,株高、地径、总叶绿素、根系活力指标差异显著(P<0.05),以上指标分别比对照处理提高了49.78%、47.52%、51.24%、45.95%。