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百草枯(paraquat,PQ)是一种广谱、灭生性有机杂环类除草剂。由于百草枯的广泛应用,造成食品原料和水体污染,对人体健康产生潜在危害。目前百草枯检测方法大多需要专门的仪器设备并且操作繁琐,已无法满足现场快速检测的要求。因此,研究和建立一种方便、安全和快速的检测方法具有重要意义。本文以多克隆抗体和胶体金合成标记技术为基础,建立了百草枯的酶联免疫(ELISA)和金标免疫层析(GICA)检测方法,并将其应用于食品中的检测。首先以4,4’-联吡啶和碘甲烷为起始原料,经三步反应合成了百草枯半抗原N-甲基-N′-戊酸基-二吡啶二溴化物,经LC/MS、1HNMR和IR鉴定结果表明,所得产物即为百草枯半抗原(简称PQ-h),其纯度为96%,得率为69%。通过混合酸酐法偶联大分子蛋白载体牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)制备免疫抗原(PQ-h-BSA)和包被抗原(PQ-h-OVA),并进行结构鉴定。利用分光光度法测定百草枯半抗原与BSA的偶联比为6:1。通过免疫新西兰大白兔,获得特异性多克隆抗体,效价为51200。建立了PQ检测的间接竞争ELISA方法,经过多次棋盘试验,最终确立最适包被抗原浓度为0.3μg/mL,抗体最佳稀释度为1:5000。该方法的半数抑制率IC50为5.13 ng/mL,最低检出限为0.005 ng/mL。百草枯与敌草快的交叉反应率小于0.1%。大豆样品的加标回收率在70%~80%之间,相对标准偏差(RSD)低于10%。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,通过研究胶体金与抗体蛋白作用过程,确定稳定标记1 ml胶体金需8.1μg抗体蛋白,标记体系的最佳pH为8.5。以金标抗体作为分析探针,PQ-h-OVA作为竞争抗原,以羊抗兔IgG为控制抗体,构建直接竞争胶体金标免疫层析检测体系。确定膜上包被抗原和羊抗兔二抗的最佳包被浓度分别为0.5 mg/ml和0.11 mg/ml。金标目测检出限为10 ng/ml,检测时间约5 min。方法的重复性和稳定性较好,经推测,该试纸条在室温下至少可以保存5个月。对大豆进行加标回收试验,回收率较好。本研究所建立的检测食品中PQ残留的间接ELISA法和GICA法,快速、方便,具有较好的实用价值,为ELISA检测试剂盒和金标试纸条检测食品中PQ的进一步研究提供了重要的实验依据。