脑利钠肽（Brain Natriuretic Peptide,BNP）是一种治疗急性心衰的药物,由32个氨基酸残基组成。BNP的第10个和第26个半胱氨酸之间形成二硫键,其中的17个氨基酸组成的环状结构是BNP的功能域。2005年重组人脑利钠肽（Recombinant human brain natriuretic peptide,rh BNP）在国内批准上市,《中国药典》三部（2020版）对生物制品中宿主蛋白质残留量（Host cell protein,HCP）与外源性DNA残留量做出明确规定,大肠埃希菌菌体蛋白质残留量不高于蛋白质总量的0.10%,以细菌或真菌为细胞基质生产的生物制剂外源性DNA残留量不能超过10 ng/剂量,因此需要对rh BNP中宿主蛋白质残留量与外源性DNA残留量的精确检测建立相应的方法。在建立酶联免疫吸附法（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测大肠埃希菌菌体蛋白质残留量实验中,利用大肠埃希菌菌体蛋白质标准品建立标准曲线,并根据《生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则》要求对该方法进行方法学验证,验证内容包括:准确性、精密度、专属性、定量限度、线性、范围及耐用性,结果表明此方法符合《生物制品质量控制分析方法验证技术审评一般原则》的规定,能够用于重组人脑利钠肽大肠埃希菌菌体蛋白质残留量的检测。根据《中国药典》2020版第三部外源性DNA残留量测定法规定,在检测rh BNP中外源性DNA残留量实验中,建立了DNA探针杂交法、荧光染色法（Pico Green法）和定量PCR法（Quantitative real time polymerase chain reaction,q PCR）三种方法,DNA探针杂交法中对E.coli BL21（DE3）DNA超声时间、DNA探针浓度进行了优化,结果表明标准品DNA浓度在0 ng/m L～100 ng/m L范围内条带显色呈现出递增趋势。建立q PCR法过程中,进行Taq Man荧光探针法进行正式试验前使用SYBR荧光法进行预实验,结果表明在0 fg/μL～300 pg/μL范围内可以准确定量rh BNP中外源性DNA残留量。本研究初步建立了重组人脑利钠肽中大肠埃希菌菌体宿主蛋白质残留量与外源性DNA残留量的检测方法,后续可为企业解决药物研发中质量标准建立的问题,保证研发的重组人脑利钠肽符合《中国药典》标准。