真菌诱导沉香形成及其质量评价

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沉香是沉香属木质部组织及其分泌物共同组成的天然混合物质,是一种“药香”两用材,经济价值高,用途广,可用于制药、香熏、香水、日化产品等。沉香的形成受外界胁迫,次生代谢物的合成及积累,为一个偶然、长期的过程,致使野生沉香数量稀少,难以满足沉香市场的需求。目前,已有通过人工方法诱导沉香形成,但效果不佳,沉香产量低,质量差,且存在被重金属污染的风险。生物结香法被誉为最有前景的结香技术。相关研究表明,自然感染形成的沉香内部存在多种结香真菌,高效结香菌种的筛选是该领域的一个重要研究课题。因此,为了促进沉香快速形成,本文以含油量高的野生白木香沉香作为原材料,提取内含菌种制成结香菌剂,利用高通量测序探究其菌种组成并接种至沉香树木。测定诱导产生的沉香其显色反应、薄层色谱、提取物含量和高效液相特征图谱;采用气质联用仪、高效液相色谱仪和紫外分光光度计对沉香化学成分进行定性及定量研究;并结合生物活性对诱导形成的沉香质量进行了评价。主要结论如下:(1)结香菌剂中共鉴定出了33个科,11个优势科的总相对丰度为98.23%,其中曲霉科为最优势的科,相对丰度为42.3%;检测到37个属,11个优势属的总相对丰度为98.32%,其中曲霉属为最优势的属,相对丰度为39.75%;种水平上鉴定出51个,13个优势种的总相对丰度为96.28%,其中Aspergillus penicillioides为最优势的种,相对丰度为31.0%。A.penicillioides、Aspergillus sydowii、Trichoderma spirale、Penicillium arenicola和Cladosporium halotolerans所在的属为已报道过可引起沉香树结香的属,而Gongronella butleri、Saitozyma podzolica、Cladorrhinum bulbillosum、Humicola grisea和Tetracladium marchalianum为未曾报道过引起沉香树结香的新菌株。(2)经结香菌剂处理后,明显形成了沉香。沉香显色反应、薄层色谱、醇溶性浸出物含量(11.60-21.73%)和高效液相特征图谱均符合药典和沉香行业标准的要求,结香6个月的沉香便可用于入药或推向市场。结香12个月时,沉香的醇溶性浸出物和精油含量最高,达到较佳的采收状态。相同结香时间,白木香形成的沉香中醇溶性浸出物和精油含量高于柯拉斯那,白木香更适合此结香菌剂。(3)形成的沉香中倍半萜和2-(2-苯乙基)色酮类物质相对含量之和为90.55-98.99%,随着结香时间延长而增加,但同一树种结香12与18个月的沉香较相似,倍半萜和2-(2-苯乙基)色酮类物质相对含量之和差别不大,也说明了结香12个月为较佳的采收时期。同一结香时间,白木香形成的沉香中倍半萜和2-(2-苯乙基)色酮类物质相对含量之和高于柯拉斯那,也表明白木香更适合此结香菌剂。2-(2-苯乙基)色酮、沉香四醇和6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮含量分别为0.09-0.35%、0.29-0.78%和0.17-0.64%,随着结香时间延长,沉香四醇含量下降,而6,7-二甲氧基-2-(2-苯乙基)色酮和2-(2-苯乙基)色酮含量先上升后下降。总色酮含量为4.01-12.30%,与醇溶性浸出物含量正相关,均随着结香时间延长,呈先上升后下降的趋势。(4)形成的沉香活性强,DPPH自由基清除率、ABTS+自由基清除率、总还原力、乙酰胆碱酯酶活性抑制率和α-葡萄糖苷酶活性抑制率的最大值分别达到野生沉香的93.74-102.31%、75.38-95.52%、63.07-80.29%、102.56-109.16%和68.32-100.39%。形成的沉香生物活性与野生沉香接近。本研究开发了高效结香微生物菌剂,结香速度快、化学成分稳定、质量好,对沉香树木结香及促进沉香产业发展具有重要指导作用。
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