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目的:建立皮肤神经染色和评价方法,观察色素痣患者表皮神经纤维的变化。
方法:本实验选择7名健康志愿者作为正常对照,10名色素痣患者作为实验对象行皮肤神经活体组织活检,使用抗PGP9.5抗体作为神经轴索的标记物,采用免疫组织化学染技术标记皮肤神经纤维。分别以计数法和评分法对同一皮肤标本中的神经数量进行评价。
结果:正常皮肤标本中,可以看到真皮浅层神经束呈树枝状。当神经束到达乳头层时,形成平行于表皮的表皮下神经丛,并发出单根无髓神经纤维,穿过基底膜进入表皮层,分支或不分支垂直走向皮肤表面。正常皮肤IENFD为859.5±235.9根/mm2,平均评分3.0。色素痣组IENFD为83.7±107.4根/mm2(t=9.215,P=0.0001),平均评分2.2±0.6(t=3.215,P=0.0058)。有8例标本使用2种方法得出的结果趋势是一致的,2种方法的总体符合率为80%。将色素痣患者的皮肤标本按照活检部位分成3组:面部组,颈部组和肢体组。应用评分法,三组标本无统计学差异(P>0.05)。应用计数法,可以见到面部组的神经数量最多(P<0.05),肢体和颈部的神经数量一样(P>0.05)。将色素痣患者的皮肤标本按照患者年龄分成2组:青年组和中年组。2种种方法均可以见到青年组的神经分布情况比中年组明显好。将色素痣患者的皮肤标本按照性别分成男女2组,统计学上均无显著差异(P>0.05)。
结论:使用抗PGP9.5抗体作为神经轴索的标记物,进行免疫组化染色,清楚地显示出皮肤中丰富的神经纤维。皮肤神经染色可以直观描述皮肤神经的结构,为进一步研究皮肤神经病理提供一个有效的平台。
我们在本实验中采取了2种方法来评价表皮神经。一种方法是目前采用较多的测量表皮神经纤维密度方法;另一种方法是采用半定量方法,兼顾表皮神经的数量和形态。评分法在评价表皮神经时不如计数法精确,但是数量结合形态的评分法则能够更客观地反映表皮神经的实际情况。我们认为,2种方法所取得的结果基本一致,均可以在实验中作为表皮神经的评价方法应用。在多数情况下,计数法较评分法更为精确;在少数情况下,评分法较计数法更能够客观地反映表皮神经的实际情况。
作为尝试,我们选择了色素痣患者作为研究对象。结果表明,2种方法均显示色素痣患者表皮神经明显少于正常对照组(P<0.01)。我们按照皮损部位、患者性别、年龄对色素痣表皮神经分布情况进行了比较。面部色素痣表皮神经的数量远远高于颈部和肢体,但差异没有统计学意义(P>0.05)。青年人色素痣内表皮神经的密度明显高于中年人。虽然应用计数法没有统计学意义(P>0.05),但评分法的结果在统计学上有显著差异(P<0.05)。色素痣内表皮神经的减少不存在性别差异。