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[摘要] 目的 研究Survivin和Livin在骨肉瘤中的表达及其临床意义。方法 对38例骨肉瘤及20例骨软骨瘤患者的临床病理资料进行回顾性分析,应用免疫组织化学染色结果进行统计学分析。结果 Survivin和Livin在38例标本中阳性率分别为44.7%(17/38)和55.3%(21/38),Survivin和Livin的表达与患者年龄、性别、骨肉瘤亚型无明显关系,但与Enneking外科分期有关,Ⅰ～ⅡA期与ⅡB～Ⅲ期之间肿瘤表达率差异明显(P<0.05)。结论 Survivin和Livin在骨肉瘤组织中有较高比例的表达,可作为预测骨肉瘤预后的重要指标。
[关键词] 骨肉瘤;Survivin;Livin
[中图分类号] R738[中图分类号] A[文章编号] 1673-9701(2009)24-26-02
Expression of Survivin and Livin in Human Osteosarcoma and Its Significance
YANG BaojunWANG Guizhi
Medical Group General Hospital of Pingdingshan Coal Leveling Industry,Henan 467000,China
[Abstract] Objective To investigate the expression of survivin and livin in human osteosarcoma. Methods The clinical pathological data of 38 cases of osteosarcoma and 20 cases of osteochondroma were studied retrospectively and the statistical analysis was made of the results obtained by use of immunohistochemistry. Results The expression rates of survivin and livin in osteosarcoma was 44.7%(17/38) and 55.3%(21/38),respectively. The expression of survivin and livin was correlated with Enneking surgical staging. Its expression rate in Enneking surgical staging Ⅰ-ⅡA was significiantly lower than that in staging ⅡB-Ⅲ(P<0.05). The expression of survivin and livin was not correlated with age and sex and pathological subtypes of osteosarcoma. Conclusion A high expression of survivin and livin is found in the osteosarcoma tissue,which can be used as an important index for predicting prognostic condition of human osteosarcoma.
[Key Words] Osteosarcoma;Survivin;Livin
随着肿瘤分子遗传学与分子生物学的发展,凋亡作为一种程序性细胞死亡,广泛参与细胞的各种生理、病理过程,不仅对细胞发生、分化和维持机体稳态都有很重要的作用,而且还可以通过清除变异的细胞和改变基因表达阻止细胞发生转化。因此,如果凋亡被抑制,基因发生突变的细胞就会得以继续生存,从而通过突变导致肿瘤的发生和发展。本文采用免疫组化方法研究凋亡抑制蛋白Survivin和Livin在人骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。
1材料与方法
1.1材料
收集河南省平顶山市平煤医疗集团总医院病理科1998～2007年诊断骨肉瘤病例38例,术前均未进行放疗和化疗,其中男性23例,女性15例,年龄7～43岁,平均年龄21岁,所有患者均手术治疗,诊断明确,另选取20例骨软骨瘤标本作为对照组。兔抗人Survivin多克隆抗体购于Labvision生物公司(Rb-6),兔抗人Livin多克隆抗体购于武汉博士德生物公司(BA1743);免疫组化SP试剂盒及DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术公司。
1.2方法
免疫组化染色采用SP法,4μm厚切片,EDTA抗原修复液进行抗原修复。所用抗Survivin抗体浓度为1∶100,抗Livin抗体浓度为1∶50。染色步骤按说明书进行,DAB显色,苏木素复染,透明封固,骨软骨瘤对照组与骨肉瘤组在相同条件下同时处理。
1.3阳性结果判断
以胞核和(或)胞质出现黄色或黄棕色染色为阳性细胞。随机观察10个高倍镜(400×)视野,每个视野计数100个细胞,共计数1000个细胞,阳性表达细胞数<5%为0分,5%～24%为1分,25%～49%为2分,>50%为3分(如封三图4和图5);阳性强度黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。将细胞阳性率与染色强度积分相乘:0分为表达阴性,1~3分为表达弱阳性,4~9分为表达强阳性。
1.4统计学处理
应用SPSS10.0软件进行统计学分析,进行x2检验。
2结果
骨肉瘤中Survivin和Livin的表达:Survivin和Livin均表达于骨肉瘤细胞浆内,Survivin和Livin在38例标本中阳性率分别为44.70%(17/38)和55.30%(21/38),Survivin和Livin的表达与患者年龄、性别、骨肉瘤亚型无明显关系,但与Enneking外科分期有关,Ⅰ～ⅡA期与ⅡB～Ⅲ期肿瘤表达率差异明显(P<0.05),见表1,与对照组骨软骨瘤阳性率有显著性差异(P<0.05)。
3讨论
骨肉瘤是原发于骨组织的最常见的恶性肿瘤,发病年龄多位于11～20岁,其次为21～30岁。此类肿瘤恶性程度高,常危及患者生命。随着20世纪90年代基因治疗的兴起,开辟了肿瘤治疗的新途径。凋亡抑制基因,是一类对肿瘤细胞起抑制作用的基因。细胞的过度增殖和/或细胞凋亡受到抑制在肿瘤的发生与演进过程中发挥了重要的作用。IAPs是一组caspase抑制蛋白,在人类中包括8个成员:c-IAPl,c-lAP2,NAIP,XIAP,Ts-IAP,Apollon,Survivin和Livin,通过BIR结构与caspase结合并抑制caspase活性,发挥抗细胞凋亡的作用[1]。其中Survivin和Livin是IAP家族中新发现的两种蛋白,两者都可以直接或间接抑制caspase凋亡信号转导过程中的起始分子caspase-9的活化、活性以及效应分子caspase-3/-7的活性而阻断凋亡的发生过程[2,3]。另外,Survivin在有丝分裂期与纺锤体上的微管蛋白作用而调节细胞分裂,在G2/M期高表达,而在G1和S期迅速降解[4]。Survivin和Livin的表达具有特异性,在绝大多数分化成熟的组织(除胎盘等)不表达或低表达,而在胚胎组织以及大多数实体瘤组织中高表达[5,6]。
本研究中,Survivin和Livin均表达于骨肉瘤细胞浆,少量可见细胞核表达,同时有人发现Survivin胞核表达在部分肿瘤中临床意义高于细胞浆[7]。Survivin和Livin在38例标本中阳性率分别为44.7%(17/38)和55.3%(21/38)。Survivin和Livin的表达与患者年龄、性别、骨肉瘤亚型无明显关系,但与Enneking外科分期有关,Ⅰ～ⅡA期与ⅡB～Ⅲ期之间肿瘤表达率差异明显(P<0.05)。众所周知,Enneking外科分期越高,患者预后越差,生存期越短。根据上述研究提示,Survivin和Livin可作为判断患者预后的指标,为进一步针对Survivin和Livin的基因治疗的研究提供了直接的可行性证据。
[参考文献]
[1] Nachmias B, Ashhab Y, Ben-Yehuda D. The inhibitor of apoptosis protein family (IAPs):an emerging therapeutic target in cancer[J]. Semin Cancer Biol,2004,14:231-243.
[2] Kappler M, Rot S, Taubert H, et al. The effects of knockdown of wild-type survivin,survivin-2B or survivin-delta3 on the radiosensitization in a soft tissue sarcoma cells in vitro under different oxygen conditions[J]. Cancer Gene Ther,2007,14:994-1001.
[3] Kasof GM,Gomes BC. Livin,a novel inhibitor of apoptosis protein family member[J]. J Biol Chem,2001,276:3238-3246.
[4] Knauer SK, Bier C, Habtemichael N, et al. The Survivin-Crm1 interaction is essential for chromosomal passenger complex localization and function[J]. EMBO Rep,2006,7:1259-1265.
[5] Altieri DC. Survivin, versatile modulation of cell division and apoptosis in cancer[J]. Oncogene,2003,22:8581-8589.
[6] Lin JH,Deng G,Huang Q,et al. KIAP,a novel member of the inhibitor of apoptosis protein family[J]. Biochem Biophys Res Commun,2000,279:820-831.
[7] Li F. Survivin study what is the next wave[J]. J Cell Physiol, 2003, 197(1):8-29.
(收稿日期:2009-02-17)
[关键词] 骨肉瘤;Survivin;Livin
[中图分类号] R738[中图分类号] A[文章编号] 1673-9701(2009)24-26-02
Expression of Survivin and Livin in Human Osteosarcoma and Its Significance
YANG BaojunWANG Guizhi
Medical Group General Hospital of Pingdingshan Coal Leveling Industry,Henan 467000,China
[Abstract] Objective To investigate the expression of survivin and livin in human osteosarcoma. Methods The clinical pathological data of 38 cases of osteosarcoma and 20 cases of osteochondroma were studied retrospectively and the statistical analysis was made of the results obtained by use of immunohistochemistry. Results The expression rates of survivin and livin in osteosarcoma was 44.7%(17/38) and 55.3%(21/38),respectively. The expression of survivin and livin was correlated with Enneking surgical staging. Its expression rate in Enneking surgical staging Ⅰ-ⅡA was significiantly lower than that in staging ⅡB-Ⅲ(P<0.05). The expression of survivin and livin was not correlated with age and sex and pathological subtypes of osteosarcoma. Conclusion A high expression of survivin and livin is found in the osteosarcoma tissue,which can be used as an important index for predicting prognostic condition of human osteosarcoma.
[Key Words] Osteosarcoma;Survivin;Livin
随着肿瘤分子遗传学与分子生物学的发展,凋亡作为一种程序性细胞死亡,广泛参与细胞的各种生理、病理过程,不仅对细胞发生、分化和维持机体稳态都有很重要的作用,而且还可以通过清除变异的细胞和改变基因表达阻止细胞发生转化。因此,如果凋亡被抑制,基因发生突变的细胞就会得以继续生存,从而通过突变导致肿瘤的发生和发展。本文采用免疫组化方法研究凋亡抑制蛋白Survivin和Livin在人骨肉瘤组织中的表达及其临床意义。
1材料与方法
1.1材料
收集河南省平顶山市平煤医疗集团总医院病理科1998～2007年诊断骨肉瘤病例38例,术前均未进行放疗和化疗,其中男性23例,女性15例,年龄7～43岁,平均年龄21岁,所有患者均手术治疗,诊断明确,另选取20例骨软骨瘤标本作为对照组。兔抗人Survivin多克隆抗体购于Labvision生物公司(Rb-6),兔抗人Livin多克隆抗体购于武汉博士德生物公司(BA1743);免疫组化SP试剂盒及DAB显色试剂盒均购自福州迈新生物技术公司。
1.2方法
免疫组化染色采用SP法,4μm厚切片,EDTA抗原修复液进行抗原修复。所用抗Survivin抗体浓度为1∶100,抗Livin抗体浓度为1∶50。染色步骤按说明书进行,DAB显色,苏木素复染,透明封固,骨软骨瘤对照组与骨肉瘤组在相同条件下同时处理。
1.3阳性结果判断
以胞核和(或)胞质出现黄色或黄棕色染色为阳性细胞。随机观察10个高倍镜(400×)视野,每个视野计数100个细胞,共计数1000个细胞,阳性表达细胞数<5%为0分,5%～24%为1分,25%～49%为2分,>50%为3分(如封三图4和图5);阳性强度黄色为1分,棕黄色为2分,棕褐色为3分。将细胞阳性率与染色强度积分相乘:0分为表达阴性,1~3分为表达弱阳性,4~9分为表达强阳性。
1.4统计学处理
应用SPSS10.0软件进行统计学分析,进行x2检验。
2结果
骨肉瘤中Survivin和Livin的表达:Survivin和Livin均表达于骨肉瘤细胞浆内,Survivin和Livin在38例标本中阳性率分别为44.70%(17/38)和55.30%(21/38),Survivin和Livin的表达与患者年龄、性别、骨肉瘤亚型无明显关系,但与Enneking外科分期有关,Ⅰ～ⅡA期与ⅡB～Ⅲ期肿瘤表达率差异明显(P<0.05),见表1,与对照组骨软骨瘤阳性率有显著性差异(P<0.05)。
3讨论
骨肉瘤是原发于骨组织的最常见的恶性肿瘤,发病年龄多位于11～20岁,其次为21～30岁。此类肿瘤恶性程度高,常危及患者生命。随着20世纪90年代基因治疗的兴起,开辟了肿瘤治疗的新途径。凋亡抑制基因,是一类对肿瘤细胞起抑制作用的基因。细胞的过度增殖和/或细胞凋亡受到抑制在肿瘤的发生与演进过程中发挥了重要的作用。IAPs是一组caspase抑制蛋白,在人类中包括8个成员:c-IAPl,c-lAP2,NAIP,XIAP,Ts-IAP,Apollon,Survivin和Livin,通过BIR结构与caspase结合并抑制caspase活性,发挥抗细胞凋亡的作用[1]。其中Survivin和Livin是IAP家族中新发现的两种蛋白,两者都可以直接或间接抑制caspase凋亡信号转导过程中的起始分子caspase-9的活化、活性以及效应分子caspase-3/-7的活性而阻断凋亡的发生过程[2,3]。另外,Survivin在有丝分裂期与纺锤体上的微管蛋白作用而调节细胞分裂,在G2/M期高表达,而在G1和S期迅速降解[4]。Survivin和Livin的表达具有特异性,在绝大多数分化成熟的组织(除胎盘等)不表达或低表达,而在胚胎组织以及大多数实体瘤组织中高表达[5,6]。
本研究中,Survivin和Livin均表达于骨肉瘤细胞浆,少量可见细胞核表达,同时有人发现Survivin胞核表达在部分肿瘤中临床意义高于细胞浆[7]。Survivin和Livin在38例标本中阳性率分别为44.7%(17/38)和55.3%(21/38)。Survivin和Livin的表达与患者年龄、性别、骨肉瘤亚型无明显关系,但与Enneking外科分期有关,Ⅰ～ⅡA期与ⅡB～Ⅲ期之间肿瘤表达率差异明显(P<0.05)。众所周知,Enneking外科分期越高,患者预后越差,生存期越短。根据上述研究提示,Survivin和Livin可作为判断患者预后的指标,为进一步针对Survivin和Livin的基因治疗的研究提供了直接的可行性证据。
[参考文献]
[1] Nachmias B, Ashhab Y, Ben-Yehuda D. The inhibitor of apoptosis protein family (IAPs):an emerging therapeutic target in cancer[J]. Semin Cancer Biol,2004,14:231-243.
[2] Kappler M, Rot S, Taubert H, et al. The effects of knockdown of wild-type survivin,survivin-2B or survivin-delta3 on the radiosensitization in a soft tissue sarcoma cells in vitro under different oxygen conditions[J]. Cancer Gene Ther,2007,14:994-1001.
[3] Kasof GM,Gomes BC. Livin,a novel inhibitor of apoptosis protein family member[J]. J Biol Chem,2001,276:3238-3246.
[4] Knauer SK, Bier C, Habtemichael N, et al. The Survivin-Crm1 interaction is essential for chromosomal passenger complex localization and function[J]. EMBO Rep,2006,7:1259-1265.
[5] Altieri DC. Survivin, versatile modulation of cell division and apoptosis in cancer[J]. Oncogene,2003,22:8581-8589.
[6] Lin JH,Deng G,Huang Q,et al. KIAP,a novel member of the inhibitor of apoptosis protein family[J]. Biochem Biophys Res Commun,2000,279:820-831.
[7] Li F. Survivin study what is the next wave[J]. J Cell Physiol, 2003, 197(1):8-29.
(收稿日期:2009-02-17)