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摘要 采用酶联免疫反应检测技术（ELISA）对攀枝花烟区烟草病毒病发生情况进行检测，分析了该次病毒病发生原因，并有针对性地提出了综合防治措施。结果表明，从74份采集样品中检出烟草普通花叶病毒病（TMV）53份，检出率71.62%；黄瓜花叶病毒病（CMV）41份，检出率55.41%；马铃薯Y病毒病（PVY）37份，检出率50.00%；番茄花叶病毒病（ToMV）8份，检出率10.81%。74份检测样品中受2种或2种以上病毒复合侵染的样片有68份，检出比91.89%。该次病毒病发生原因主要包括气候因素、品种因素、病原因素和栽培管理因素；综合防治措施包括控制传染源、切断传播途径、选种抗性品种、加强田间管理和药剂防治。
关键词 烟草；病毒病；酶联免疫；防治措施
中图分类号 S572 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）25-08600-03
Abstract The occurrence of tobacco virus diseases in Panzhihua was detected by enzymelinked immunoassay （ELISA）； the causes of viral disease were analyzed； and specific measures were put forward to control virus disease. Results showed that among 74 collected samples， 53 TMV samples were detected， with detection rate of 71.62%； 41 CMV samples， with detection rate of 55.41%； 37 PVY samples， with detection rate of 50.00%； 8 ToMV samples， with detection rate of 10.81%. 68 samples contained two or more viruses， and the detection ratio was 91.89%. The causes of viral disease concluded climatic factors， variety factors， pathogenic agent， cultivation and management. Some measures were put forward to control the occurrence of tobacco virus， such as controlling infection， cutting off the routes of transmission， selecting resistant varieties， strengthening field management and chemical control.
Key words Tobacco； Virus； ELISA； Prevention measures
烟草是攀枝花市主要经济作物之一[1-2]。随着近年全球气候的变化，轮作制度得不到完全实施，抗病品种推广面积有限，使得攀枝花市烟草病毒病发生有加重趋势。病毒病被称为植物的“癌症”，没有有效的防治措施，且易“一病多症或多病一症”，不易辨识。目前针对烟草病毒病的检测方法主要有指示植物法、电镜检测法、血清学检测法和分子生物学检测技术[3]。笔者采用灵敏度高、准确性好、操作快速方便的酶联免疫吸附法（ELISA）对攀枝花烟区烟草病毒病发生情况进行检测，分析了病毒病发生原因，并提出了综合防治措施，以期为控制烟草病毒病发生提供借鉴。
1 攀枝花烟草病毒病的检测
1.1 材料与方法
2 攀枝花烟草病毒病的发生原因
2.1 气候因素
全球气候变化可能会导致病毒种群结构、介体昆虫种类及数量和烟草自身抗性的改变，从而影响烟草病毒病发生情况[2]。例如暖冬的气候特征使得越冬蚜虫基数增大，导致TMV、CMV、TEV等蚜传病毒病大规模发生[5]。旺长期至打顶期天气多变，降温导致寄主抵抗力降低，加重病毒病发生情况；大风天气叶片相互摩擦，增加病毒病田间传播机会；降雨使得土壤板结，透气性变差，烟株生长势和抵抗力减弱都会加重病毒病的发生[6]。
2.2 品种因素
目前四川烟区种植面积最大的云烟85、云烟87、红花大金元等品种烟叶品质好、产值高，但都是较感病品种，一旦受到病毒病的侵染将会给产量、品质等带来严重影响。据李斌等[7]的测算，当病情指数达到30以上时，产量损失可达50%，产值损失可达70%。中烟90、K326、NC82、CV91等品种也只是对某一种病毒病表现中抗，对2种及以上病毒病具有抗性的品种很少，目前从种质资源库中仅鉴定出10余种[8]。种植品种结构单一、抗源遗传基础狭窄、抗性与品质兼优品种少、缺乏广谱抗性品种都是导致攀枝花烟草病毒病严重发生的重要因素。
2.3 病原因素
随着病毒病发生日趋严重，主要病毒病株系分化越来越复杂，目前已鉴定出TMV 4个株系，CMV至少3个株系[2]。不同株系在烟草上表现症状不尽相同，这是产生一病多症的原因，增加了病毒病鉴别难度。在该次调查中发现攀枝花烟区TMV主要有2种表现症状，一是单纯花叶，叶片颜色不均，厚薄不一形成泡状；二是在叶面上产生不规则褐色坏死斑，从而使叶片畸形、皱缩。调查中发现CMV也有不同的表现症状，有的表现为沿叶脉两侧产生闪电状坏死斑纹；有的则叶片叶基拉长，侧翼拉紧，叶片革质化没有油分，严重者呈鼠尾状。另外，田间发病烟株往往是2种或多种病毒复合侵染，有的还与真菌和细菌性病害同时发生，不仅难以鉴定病原，更加重病害危害。 2.4 栽培管理因素
随着农村种植结构的调整，设施蔬菜、花卉等经济作物种植面积增加为病原及介体昆虫提供了越冬场所，是导致病毒病连年发生的因素之一。常年连作病毒病源积累也使病毒病害逐年加重[9]。育苗及农事操作管理过程中规范化栽培措施得不到落实，增加了病毒病传播的机会。
3 攀枝花烟草病毒病的防治措施
针对病毒病害应以预防为主，采取综合防治措施，将损失控制在最低限度。
3.1 控制传染源
研究表明，除TMV病原可在土壤中病株残体上存活过冬外，CMV、PVY、TEV、PVX等多种病毒均需在活体寄主内越冬。寄主种类主要包括蔬菜、杂草、多年生树木活体及繁殖体[10-11]，因此，烟田选地应远离设施保护地和村庄，及时将病株残体带出烟田并集中焚毁处理，防除田间杂草，不与十字花科、茄科及葫芦科作物轮作、邻作、间作。
3.2 防治介体昆虫，切断传播途径
在危害烟草的20多种病毒病中，至少有16种病毒病可由介体昆虫传播[12-13]。传播烟草病毒病介体昆虫有30多种，多为刺吸式口器昆虫，主要有蚜虫、叶蝉、飞虱、蓟马、烟盲蝽、粉虱、跳甲等。影响最严重的是蚜虫，刺吸烟株汁液，危害叶、茎、花和果，降低品质和产量，分泌蜜露影响光合作用，传播TMV、TEV、PVY等多种病毒病，严重影响烟叶生产。防治介体昆虫是控制烟草病毒病传播和发生的有效措施之一，目前针对媒介昆虫的防治措施主要有化学药剂防治、物理防治、生物防治等。拟除虫菊酯类、吡虫啉、啶虫脒等内吸性杀虫剂对刺吸性口器昆虫有良好的防治效果[14-16]，乳油剂型农药在传毒昆虫防治中效果更加明显；利用黄板诱捕烟蚜、银灰色地膜趋避烟蚜，同时也能很好地保肥保墒促进烟株生长；选择杀虫剂时，注意保护介体昆虫天敌资源，在团棵到旺长期施药，重点喷洒幼嫩的叶、茎、叶背面等蚜虫集中部位；适当调整移栽期，避开蚜虫向烟田迁飞高峰期，降低介体昆虫种群密度以减轻病毒病的传播和发生。
3.3 选种抗性品种
选择抗性品种是防治烟草病毒病最经济有效的方式，根据往年病毒病发生情况选择抗性品种可有效减轻病毒病的发生。目前国内外工作人员针对发生严重的病毒病已鉴定出多种抗性品种（表3），同时通过化学物理诱变、细胞工程、转基因技术等对种植资源进行创新，获得一些具有稳定优良抗性的品种，如PVY高抗品种NC744等[17]。
3.4 加强田间管理
苗床期注意环境卫生，对苗床、种子及操作工具进行消毒，及时清除带病烟株。有机肥与化肥合理配比，适当提高钾肥用量，施足底肥，及时追肥、培土、除草，促进烟株成长，增强自身抗病性。调整种植结构合理轮作，不与茄科、十字花科、葫芦科作物轮作，与小麦、玉米等十字花科作物轮作或实行水旱轮作。推广使用抑芽剂，也能减轻田间作业对病毒病的传播。
3.5 药剂防治
目前用于防治烟草病毒病的药剂主要为营养调节剂和保护剂，包括抗病毒制剂、微量元素和生物活性物质等，尚无能够有效清除烟株体内病毒的药剂。抗病毒病剂、微量元素及生物活性物质主要通过诱导植物产生抗病毒活性，或使病毒钝化，以减弱病毒的侵染和繁殖，提高植物抗病性。相关研究表明，3.95%病毒必克可湿性粉剂、20%病毒A可湿性粉剂、5%菌毒清水剂、1.5%植病灵水剂、22%金叶宝等抗病毒制剂在生产上具有较好防效[18-21]。谈文等[22]研究表明，锌、铜、锰等微量元素能够抑制烟草花叶病的发生，因此可于旺长期叶面喷施0.1%硫酸锌提高烟株对病毒病的抵抗性。生物活性物质主要包括蛋白、多糖等，目前生产上使用较多的主要有超敏蛋白、氨基寡糖、水杨酸[23]、康壮素、食用菌浸提物[24]、中药制剂的“除病毒9803”[25]等。
参考文献
[1] 汪莹，夏先全，杨建，等.四川烟草病毒病毒源植物检测及分析[J].西南农业学报，2011（6）：1237-1240.
[2] 彭曙光.我国烟草病毒病的发生及综合防治研究进展[J].江西农业学报，2011，23（1）：115-117.
[3] 张伟，徐硕，陈德鑫.常用植物病毒病检测技术比较[J].南方农业，2013（12）：24-28.
[4] 青玲，刘映红，马丽娜.武隆烟区烟草病毒病的病原初步鉴定[J].西南农业大学学报：自然科学版，2005，27（3）：319-322.
[5] 马国胜，郭红，陈娟.浅析皖北烟草脉斑病连年发生并间歇式暴发原因及对策[J].植物保护，2000，26（4）：26-28.
[6] 马国胜，何博如.烟草病毒病的发生与防治研究进展[J].河南农业科学，2005（2）：42-46.
[7] 李斌，夏先全，姚革，等.四川烟草主产区烟草病毒病种类及流行分析[J].西南农业学报，2007，20（6）：1237-1240.
[8] 杨健，张金霖，王清友，等.烟草病毒病抗性种质资源鉴定与创新研究进展[J].湖南农业科学，2010（23）：96-99.
[9] 杨德廉，王凤龙，钱玉梅.我国烟草病毒病的防治研究策略[J].中国烟草科学，2001，22（1）：46-48.
[10] 朱贤朝，王彦亭，王智发.中国烟草病害[M].北京：中国农业出版社，2002.
[11] 马国胜，郭红，高正良，等.固镇县烟草脉斑病流行规律调查研究[J].烟草科技，2000（2）：46-47.
[12] 陈瑞泰.世界烟草病害形式[J].中国烟草，1989（3）：5-11.
[13] 杜进平，王兰珍.烟草病毒介体昆虫的现状与展望[J].中国烟草，1991（2）：17-21.
[14] BROADBENT L.Insecticidal control of the spread of plant viruses[J].Annu Rev Entomol，1957，2：339-354. [15] NAULT L R.Arthropod transmiaaion of plant viruses：a new synthsis[J].Ann Entomol Soc Am，1997，90（50）：521-541.
[16] PERRING T M，GRUENHAGEN N M，FARRAR C A.Management of plant viral disease through chemical control of insect vectors[J].Annu Rev Entomol，1990，44：457-481.
[17] GOODING G V，KENNEDY G G.Resistance in tobacco breeding line NC744 to potato virus Y and inoculation by aphids[J].Plant Disease，1985，69：396-397.
[18] 陈丽，安德荣.几种药剂防治烟草病毒病药效试验[J].植物保护，2004，30（3）：78-80.
[19] 郑宪滨，谢德平，王晓延，等.某些因素对烤烟病毒病（PVY、CMV、TMV）发病程度的影响调查[J].烟草科技，1997（4）：40-42.
[20] 陈彦春，常剑波，杨方.菌克毒克防治烟草花叶病药效初报[J].烟草科技，2001（9）：44-45.
[21] 王贵，崔卫东，张英.5种抗病毒剂对烟草花叶病防效的研究[J].烟草科技，1997（5）：45.
[22] 谈文，刘骏，李鹏昆.应用硫酸锌系统防治烟草花叶病研究[J].烟草科技，1990（1）：37-39.
[23] YAIPANI N.Endogenous salicylic acid levels correlate with accumulation of Pathogenesisrelated proteins and virusresistance in tobacco[J].Phytopathol，1993，83（7）：702-708.
[24] 孙慧，吴祖建，林奇英，等.大型真菌抗烟草花叶病（TMV）活性的初步筛选[M].北京：科学出版社，2000：199-206.
[25] 郭生国，梁嘉勋，林桂华，等.烟草病毒病综合防治技术研究[J].中国烟草科学，2004（1）：21-24.
关键词 烟草；病毒病；酶联免疫；防治措施
中图分类号 S572 文献标识码 A 文章编号 0517-6611（2014）25-08600-03
Abstract The occurrence of tobacco virus diseases in Panzhihua was detected by enzymelinked immunoassay （ELISA）； the causes of viral disease were analyzed； and specific measures were put forward to control virus disease. Results showed that among 74 collected samples， 53 TMV samples were detected， with detection rate of 71.62%； 41 CMV samples， with detection rate of 55.41%； 37 PVY samples， with detection rate of 50.00%； 8 ToMV samples， with detection rate of 10.81%. 68 samples contained two or more viruses， and the detection ratio was 91.89%. The causes of viral disease concluded climatic factors， variety factors， pathogenic agent， cultivation and management. Some measures were put forward to control the occurrence of tobacco virus， such as controlling infection， cutting off the routes of transmission， selecting resistant varieties， strengthening field management and chemical control.
Key words Tobacco； Virus； ELISA； Prevention measures
烟草是攀枝花市主要经济作物之一[1-2]。随着近年全球气候的变化，轮作制度得不到完全实施，抗病品种推广面积有限，使得攀枝花市烟草病毒病发生有加重趋势。病毒病被称为植物的“癌症”，没有有效的防治措施，且易“一病多症或多病一症”，不易辨识。目前针对烟草病毒病的检测方法主要有指示植物法、电镜检测法、血清学检测法和分子生物学检测技术[3]。笔者采用灵敏度高、准确性好、操作快速方便的酶联免疫吸附法（ELISA）对攀枝花烟区烟草病毒病发生情况进行检测，分析了病毒病发生原因，并提出了综合防治措施，以期为控制烟草病毒病发生提供借鉴。
1 攀枝花烟草病毒病的检测
1.1 材料与方法
2 攀枝花烟草病毒病的发生原因
2.1 气候因素
全球气候变化可能会导致病毒种群结构、介体昆虫种类及数量和烟草自身抗性的改变，从而影响烟草病毒病发生情况[2]。例如暖冬的气候特征使得越冬蚜虫基数增大，导致TMV、CMV、TEV等蚜传病毒病大规模发生[5]。旺长期至打顶期天气多变，降温导致寄主抵抗力降低，加重病毒病发生情况；大风天气叶片相互摩擦，增加病毒病田间传播机会；降雨使得土壤板结，透气性变差，烟株生长势和抵抗力减弱都会加重病毒病的发生[6]。
2.2 品种因素
目前四川烟区种植面积最大的云烟85、云烟87、红花大金元等品种烟叶品质好、产值高，但都是较感病品种，一旦受到病毒病的侵染将会给产量、品质等带来严重影响。据李斌等[7]的测算，当病情指数达到30以上时，产量损失可达50%，产值损失可达70%。中烟90、K326、NC82、CV91等品种也只是对某一种病毒病表现中抗，对2种及以上病毒病具有抗性的品种很少，目前从种质资源库中仅鉴定出10余种[8]。种植品种结构单一、抗源遗传基础狭窄、抗性与品质兼优品种少、缺乏广谱抗性品种都是导致攀枝花烟草病毒病严重发生的重要因素。
2.3 病原因素
随着病毒病发生日趋严重，主要病毒病株系分化越来越复杂，目前已鉴定出TMV 4个株系，CMV至少3个株系[2]。不同株系在烟草上表现症状不尽相同，这是产生一病多症的原因，增加了病毒病鉴别难度。在该次调查中发现攀枝花烟区TMV主要有2种表现症状，一是单纯花叶，叶片颜色不均，厚薄不一形成泡状；二是在叶面上产生不规则褐色坏死斑，从而使叶片畸形、皱缩。调查中发现CMV也有不同的表现症状，有的表现为沿叶脉两侧产生闪电状坏死斑纹；有的则叶片叶基拉长，侧翼拉紧，叶片革质化没有油分，严重者呈鼠尾状。另外，田间发病烟株往往是2种或多种病毒复合侵染，有的还与真菌和细菌性病害同时发生，不仅难以鉴定病原，更加重病害危害。 2.4 栽培管理因素
随着农村种植结构的调整，设施蔬菜、花卉等经济作物种植面积增加为病原及介体昆虫提供了越冬场所，是导致病毒病连年发生的因素之一。常年连作病毒病源积累也使病毒病害逐年加重[9]。育苗及农事操作管理过程中规范化栽培措施得不到落实，增加了病毒病传播的机会。
3 攀枝花烟草病毒病的防治措施
针对病毒病害应以预防为主，采取综合防治措施，将损失控制在最低限度。
3.1 控制传染源
研究表明，除TMV病原可在土壤中病株残体上存活过冬外，CMV、PVY、TEV、PVX等多种病毒均需在活体寄主内越冬。寄主种类主要包括蔬菜、杂草、多年生树木活体及繁殖体[10-11]，因此，烟田选地应远离设施保护地和村庄，及时将病株残体带出烟田并集中焚毁处理，防除田间杂草，不与十字花科、茄科及葫芦科作物轮作、邻作、间作。
3.2 防治介体昆虫，切断传播途径
在危害烟草的20多种病毒病中，至少有16种病毒病可由介体昆虫传播[12-13]。传播烟草病毒病介体昆虫有30多种，多为刺吸式口器昆虫，主要有蚜虫、叶蝉、飞虱、蓟马、烟盲蝽、粉虱、跳甲等。影响最严重的是蚜虫，刺吸烟株汁液，危害叶、茎、花和果，降低品质和产量，分泌蜜露影响光合作用，传播TMV、TEV、PVY等多种病毒病，严重影响烟叶生产。防治介体昆虫是控制烟草病毒病传播和发生的有效措施之一，目前针对媒介昆虫的防治措施主要有化学药剂防治、物理防治、生物防治等。拟除虫菊酯类、吡虫啉、啶虫脒等内吸性杀虫剂对刺吸性口器昆虫有良好的防治效果[14-16]，乳油剂型农药在传毒昆虫防治中效果更加明显；利用黄板诱捕烟蚜、银灰色地膜趋避烟蚜，同时也能很好地保肥保墒促进烟株生长；选择杀虫剂时，注意保护介体昆虫天敌资源，在团棵到旺长期施药，重点喷洒幼嫩的叶、茎、叶背面等蚜虫集中部位；适当调整移栽期，避开蚜虫向烟田迁飞高峰期，降低介体昆虫种群密度以减轻病毒病的传播和发生。
3.3 选种抗性品种
选择抗性品种是防治烟草病毒病最经济有效的方式，根据往年病毒病发生情况选择抗性品种可有效减轻病毒病的发生。目前国内外工作人员针对发生严重的病毒病已鉴定出多种抗性品种（表3），同时通过化学物理诱变、细胞工程、转基因技术等对种植资源进行创新，获得一些具有稳定优良抗性的品种，如PVY高抗品种NC744等[17]。
3.4 加强田间管理
苗床期注意环境卫生，对苗床、种子及操作工具进行消毒，及时清除带病烟株。有机肥与化肥合理配比，适当提高钾肥用量，施足底肥，及时追肥、培土、除草，促进烟株成长，增强自身抗病性。调整种植结构合理轮作，不与茄科、十字花科、葫芦科作物轮作，与小麦、玉米等十字花科作物轮作或实行水旱轮作。推广使用抑芽剂，也能减轻田间作业对病毒病的传播。
3.5 药剂防治
目前用于防治烟草病毒病的药剂主要为营养调节剂和保护剂，包括抗病毒制剂、微量元素和生物活性物质等，尚无能够有效清除烟株体内病毒的药剂。抗病毒病剂、微量元素及生物活性物质主要通过诱导植物产生抗病毒活性，或使病毒钝化，以减弱病毒的侵染和繁殖，提高植物抗病性。相关研究表明，3.95%病毒必克可湿性粉剂、20%病毒A可湿性粉剂、5%菌毒清水剂、1.5%植病灵水剂、22%金叶宝等抗病毒制剂在生产上具有较好防效[18-21]。谈文等[22]研究表明，锌、铜、锰等微量元素能够抑制烟草花叶病的发生，因此可于旺长期叶面喷施0.1%硫酸锌提高烟株对病毒病的抵抗性。生物活性物质主要包括蛋白、多糖等，目前生产上使用较多的主要有超敏蛋白、氨基寡糖、水杨酸[23]、康壮素、食用菌浸提物[24]、中药制剂的“除病毒9803”[25]等。
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[19] 郑宪滨，谢德平，王晓延，等.某些因素对烤烟病毒病（PVY、CMV、TMV）发病程度的影响调查[J].烟草科技，1997（4）：40-42.
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[24] 孙慧，吴祖建，林奇英，等.大型真菌抗烟草花叶病（TMV）活性的初步筛选[M].北京：科学出版社，2000：199-206.
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