论文部分内容阅读
【摘 要】目的：对灯盏花素注射液进行肌肉刺激性、血管刺激性、全身过敏性及溶血性实验，以评价其用药的安全性。方法：肌肉刺激性实验，主要观察2只家兔注射灯盏花素注射液后48 h的变化。血管刺激性实验，主要观察3只家兔连续 5 d注射灯盏花素注射液的变化。全身过敏实验，6只豚鼠隔日3次腹腔注射灯盏花素注射液，于首次致敏后第14d和第 21d分别静脉注射灯盏花素注射液，观察 30 m i n内动物的变化。溶血性实验，观察本品在4 h内有无溶血和聚集现象。结果：灯盏花素注射液对家兔股四头肌无刺激作用，对家兔耳缘静脉无刺激作用，对豚鼠未见过敏反应，家兔无溶血现象。结论：灯盏花素注射液的动物实验结果表明其安全可靠 。
【关键词】灯盏花素注射液；安全性
【文章编号】1004-7484（2014）04-1913-02
Safety Evaluation of Dengzhanhuasu Injection
Liang Yanjie ，Su Shoulei
（Shineway Pharmaceutical Co， Ltd， Hebei 051430， China）
【Abstract】Objective：To evaluate the reliability of Dengzhanhuasu injection by testing the muscle stimulation， vessel stimulation， hypersensitivity of total boby and haemolytic test . Methods：In the muscle stimulation test， two rabbits were observed at 48 hours after Dengzhanhuasu injection； in the vessel stimulation， three rabbits were observed at 5 days afer Dengzhanhuasu injection or saline， respectively ； in hypersensitivity of total boby， 6 guinea pigs were injected by Dengzhanhuasu in abdominal cavity in 3 times， t he last two were 14d and 21 d after first medication； in the haemolytic test， hemolysis and coagulation were mainly observed . Results：The Dengzhanhuasu injection has no stimulation to muscle and ear vein of rabbit， t he rabbits have no allergic reaction as contrast and without hemolytic reaction . Conclusion：Dengzhanhuasu injection was safety and reliable based on the animal experiment .
【Keyword s】Dengzhanhuasu injection； Safety evaluation
灯盏花素注射液为灯盏花全草中提取的黄酮类活性成分的制剂，其主要成分为黄酮，灯盏花乙素，灯盏花甲素[1]，具有轻度强心，扩张微细血管，提高心肌功能，改善心脑供血，降低白细胞自发活化率等药理作用[2]，临床上主要应用于治疗心脑血管系统疾病、糖尿病、肾病、肺源性心脏病、慢性乙型肝炎、偏头痛等[3-4]，均有较好的疗效 ，但也常见不良反应的报道[5-7] 。为了其临床用药的安全性，笔者对灯盏花素注射液进行了有关安全性试验研究 ，现将结果报告如下：
1 材料
1.1 药品与试剂
灯盏花素注射液（5ml：20mg），批号130301A1，神威药业集团有限公司 ； 5%卵蛋白液（将新鲜鸡蛋取蛋清用0.9% 氯化鈉注射液按1：20配制，现用现配）；0.9%氯化钠注射液，批号130812707，石家庄四药有限公司。
1.2 实验动物 豚鼠，体重 300～350g ；家兔 ，体重2.0～2.5 kg，均由河北省实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK（冀）2013-1-003。
2 方法
2.1肌肉刺激性实验[7]
取健康家兔 2只 ，以无菌操作法分别在其左右两腿股四头肌内各注入供试品 1.0 ml/只 ，注射后 48 h处死动物 ，解剖取出股四头肌 ，纵向切开 ，观察注射部位局部刺激反应 ，按表 1换算成相应的反应级 。
2.2血管刺激性试验[8]
取健康家兔3只，右侧耳缘静脉注射以无菌操作方法注射灯盏花素注射液原液，1ml/kg，采用自身对照，左侧耳缘静脉注射给予等体积0.9%氯化钠注射液，1次/d，连续给药5d。末次给药后48 h，肉眼观察注射部位有无红肿、充血等刺激现象，然后将动物放血处死 ， 分别距注射部位进针点2cm处向心端剪下耳缘约 2cm作为标本 ，标本用福尔马林固定 ，常规组织切片，观察血管周围变化、血管壁是否损伤、内皮细胞有无脱落、有无血栓形成以及其他病理变化 。
2.3全身主动过敏试验[8 9]
取健康豚鼠18只，随机分为3组（每组6只）：A阴性对照（0.9%氯化钠注射液）组、B阳性对照（5%卵蛋白液）组、C灯盏花素注射液（原液）组，各组豚鼠隔日分别腹腔注射0.9%氯化钠注射液、5 %卵蛋白液和灯盏花素注射液各 0.5 ml进行致敏 ， 共3次。然后各组再分为两组 ，每组3只 ，于首次注射后的第14d和 21d ，由上肢外侧静脉注射0.9%氯化钠注射液、5 %卵蛋白液和灯盏花素注射液（原液）各1.0 ml进行激发 ，观察豚鼠在激发后30 min内有无过敏症状 ， 如躁动、抓鼻、竖毛、呼吸困难、痉挛、休克甚至死亡等症状 ， 如有反应可按表2分级，判定其是否合格。若反应级数达2级以上（包括2级）时，可认为过敏实验不合格。按表2分级 ，判定其反应级数 2.4体外溶血实验[8 10]
取健康家兔1只，自心脏取血20ml，置入含玻璃珠的三角瓶中，振摇10 分钟，去除纤维蛋白，使成脱纤血液。加入0.9%氯化钠注射液约10倍量，摇匀，每分钟1000?1500转离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠注射液按上述方法洗涤 2～3 次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化注射液制成2%的混悬液，供试验用。
取试管7支 ，编号排列于试管架上，按表 3加入各种溶液 ，第6管不加灯盏花素注射液作为空白对照管 ；第7管不加药液 ，用纯化水代替0.9%氯化钠注射液，作为溶血的阳性对照组 ，将各管轻轻摇匀 ，在37±0.5℃ 水浴中保温4h，开始每隔15 min观察1次 ，1h后 ，每隔1h观察1次 ，记录4h 。
试2.5
全溶血：溶液澄明红色，管底无细胞残留；部分溶血：溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留；无溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色澄明；凝集：虽无溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不分散 。
3.结果
3.1 肌肉刺激性实验
注射后不同时间观察结果股四头肌表面未见明显充血 ，红肿 ，家兔活动正常 ，未见明显异常反应。两只家兔48h后健康如常 ，解剖观察给药部位股四头肌刺激反应级数各为 0级 。以上试验结果提示 ，灯盏花素注射液局部肌肉无明显剌激作用。
3.2 血管刺激性实验
家兔耳缘静脉边缘滴注5d和5 d后， 左耳缘静脉与右缘静脉经肉眼观察均未见异常反应， 组织切片镜检可见耳缘静脉内皮完整、光滑、管壁未见炎症反应， 管腔内未见血柱形成。结果表明： 灯盏花素注射液局部血管未见明显刺激作用。
3.3全身主动过敏试验
A 阴性对照（0.9%氯化钠注射液）组与C灯盏花素注射液（原液）组豚鼠分别于第 1 次致敏给药后第14 d及21 d， 由上肢外侧静脉注射灯盏花素注射液或0.9%氯化钠注射液0.5 m l，注射后豚鼠均未出现明显反应 ，判定为 0级 ，提示灯盏花素注射液未见全身主动过敏反应 ； 而B阳性对照（5%卵蛋白液）组豚鼠分别于第 1次致敏给药后第14d及21d， 由上肢外侧静脉注射5%卵蛋白液0.5 ml， ，注射后豚鼠在 5 min 内均出现兴奋不安、呼吸困难、抓鼻、颤抖、竖毛、痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡等過敏反应，判定为4级 。
3.4 体外溶血实验
第7管（阳性对照管）溶液呈现澄明红色，其余6管均末见澄明红色，红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。表明灯盏花素注射液未见明显体外溶血作用。结果见表 4 。 提示灯盏花素注射液无溶血和凝集反应 。
4 讨论
药物刺激性、过敏性、溶血性是指药物制剂经眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、关节腔、皮肤、直肠、阴道、静脉、动脉、肌肉、皮下、 静脉旁和鞘内等非口服途径给药 ，对用药局部产生的毒性 （ 如刺激性和过敏性等 ）和/或对全身产生的毒性 （ 如过敏性、溶血性等），它是临床前安全性评价的重要组成部分。药物的活性成分及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质 （如pH值、渗透压等 ） 均有可能引起刺激性和/或过敏性和/或溶血性的发生 ，从而影响用药的安全有效性。
本次实验灯盏花素注射液对红细胞未见溶血和凝集作用；家兔静脉注射、肌肉注射给药后未见血管、肌肉刺激性；豚鼠静脉注射后第14，21d，未见全身主动过敏反应；结果提示在本实验条件下，灯盏花素注射液安全性较好 ，符合中药注射液的安全性要求。
参考文献
[1] 甄健存，陈志刚，马子静.灯盏花素注射液质量评价[J].中国药学杂志，2007，42 （14）：1118
[2] 王金芳，牟忠颜，张艳.灯盏花注射液过敏反应 2例报道[J].中国中医急症， 2006 ， 15（ 3） ： 226
[3] 邓黎宁，黄青萍，蔡乐，等.灯盏花素注射液的临床应用[J].基层中药杂志，2001，15（1）：56
[4] 林勇，李林，骆志鹏.灯盏花素注射液的临床应用及安全性分析[J]. 临床合理用药2012，5（7C）：76
[5] 刘宁，刘海涛，曲亮.静脉滴注灯盏花素注射液过敏反应1例报告[J]. 齐鲁护理杂志 2006 ，（12）1 0：1928
[6] 常虹，毛丹，彭晓武.灯盏花素注射液致慢性荨麻疹1例[J]. 中华保健医学杂志2010（12）1：31
[7] 郭菁菁，沈志华，李明祥，等. 灯盏花素注射液致过敏性休克1例[J].中国药师，2012，（15）12：1775
[8] 国家食品药品监督管理局. 中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则[S].北京，2005，12：11
[9] 国家食品药品监督管理局. 中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光变态反应）研究技术指导原则[S].北京，2005，12：13
[10] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京中国医药科技出版社，2010，附录 92
【关键词】灯盏花素注射液；安全性
【文章编号】1004-7484（2014）04-1913-02
Safety Evaluation of Dengzhanhuasu Injection
Liang Yanjie ，Su Shoulei
（Shineway Pharmaceutical Co， Ltd， Hebei 051430， China）
【Abstract】Objective：To evaluate the reliability of Dengzhanhuasu injection by testing the muscle stimulation， vessel stimulation， hypersensitivity of total boby and haemolytic test . Methods：In the muscle stimulation test， two rabbits were observed at 48 hours after Dengzhanhuasu injection； in the vessel stimulation， three rabbits were observed at 5 days afer Dengzhanhuasu injection or saline， respectively ； in hypersensitivity of total boby， 6 guinea pigs were injected by Dengzhanhuasu in abdominal cavity in 3 times， t he last two were 14d and 21 d after first medication； in the haemolytic test， hemolysis and coagulation were mainly observed . Results：The Dengzhanhuasu injection has no stimulation to muscle and ear vein of rabbit， t he rabbits have no allergic reaction as contrast and without hemolytic reaction . Conclusion：Dengzhanhuasu injection was safety and reliable based on the animal experiment .
【Keyword s】Dengzhanhuasu injection； Safety evaluation
灯盏花素注射液为灯盏花全草中提取的黄酮类活性成分的制剂，其主要成分为黄酮，灯盏花乙素，灯盏花甲素[1]，具有轻度强心，扩张微细血管，提高心肌功能，改善心脑供血，降低白细胞自发活化率等药理作用[2]，临床上主要应用于治疗心脑血管系统疾病、糖尿病、肾病、肺源性心脏病、慢性乙型肝炎、偏头痛等[3-4]，均有较好的疗效 ，但也常见不良反应的报道[5-7] 。为了其临床用药的安全性，笔者对灯盏花素注射液进行了有关安全性试验研究 ，现将结果报告如下：
1 材料
1.1 药品与试剂
灯盏花素注射液（5ml：20mg），批号130301A1，神威药业集团有限公司 ； 5%卵蛋白液（将新鲜鸡蛋取蛋清用0.9% 氯化鈉注射液按1：20配制，现用现配）；0.9%氯化钠注射液，批号130812707，石家庄四药有限公司。
1.2 实验动物 豚鼠，体重 300～350g ；家兔 ，体重2.0～2.5 kg，均由河北省实验动物中心提供，实验动物生产许可证号SCXK（冀）2013-1-003。
2 方法
2.1肌肉刺激性实验[7]
取健康家兔 2只 ，以无菌操作法分别在其左右两腿股四头肌内各注入供试品 1.0 ml/只 ，注射后 48 h处死动物 ，解剖取出股四头肌 ，纵向切开 ，观察注射部位局部刺激反应 ，按表 1换算成相应的反应级 。
2.2血管刺激性试验[8]
取健康家兔3只，右侧耳缘静脉注射以无菌操作方法注射灯盏花素注射液原液，1ml/kg，采用自身对照，左侧耳缘静脉注射给予等体积0.9%氯化钠注射液，1次/d，连续给药5d。末次给药后48 h，肉眼观察注射部位有无红肿、充血等刺激现象，然后将动物放血处死 ， 分别距注射部位进针点2cm处向心端剪下耳缘约 2cm作为标本 ，标本用福尔马林固定 ，常规组织切片，观察血管周围变化、血管壁是否损伤、内皮细胞有无脱落、有无血栓形成以及其他病理变化 。
2.3全身主动过敏试验[8 9]
取健康豚鼠18只，随机分为3组（每组6只）：A阴性对照（0.9%氯化钠注射液）组、B阳性对照（5%卵蛋白液）组、C灯盏花素注射液（原液）组，各组豚鼠隔日分别腹腔注射0.9%氯化钠注射液、5 %卵蛋白液和灯盏花素注射液各 0.5 ml进行致敏 ， 共3次。然后各组再分为两组 ，每组3只 ，于首次注射后的第14d和 21d ，由上肢外侧静脉注射0.9%氯化钠注射液、5 %卵蛋白液和灯盏花素注射液（原液）各1.0 ml进行激发 ，观察豚鼠在激发后30 min内有无过敏症状 ， 如躁动、抓鼻、竖毛、呼吸困难、痉挛、休克甚至死亡等症状 ， 如有反应可按表2分级，判定其是否合格。若反应级数达2级以上（包括2级）时，可认为过敏实验不合格。按表2分级 ，判定其反应级数 2.4体外溶血实验[8 10]
取健康家兔1只，自心脏取血20ml，置入含玻璃珠的三角瓶中，振摇10 分钟，去除纤维蛋白，使成脱纤血液。加入0.9%氯化钠注射液约10倍量，摇匀，每分钟1000?1500转离心15分钟，除去上清液，沉淀的红细胞再用0.9%氯化钠注射液按上述方法洗涤 2～3 次，至上清液不显红色为止。将所得红细胞用0.9%氯化注射液制成2%的混悬液，供试验用。
取试管7支 ，编号排列于试管架上，按表 3加入各种溶液 ，第6管不加灯盏花素注射液作为空白对照管 ；第7管不加药液 ，用纯化水代替0.9%氯化钠注射液，作为溶血的阳性对照组 ，将各管轻轻摇匀 ，在37±0.5℃ 水浴中保温4h，开始每隔15 min观察1次 ，1h后 ，每隔1h观察1次 ，记录4h 。
试2.5
全溶血：溶液澄明红色，管底无细胞残留；部分溶血：溶液澄明红色或棕色，管底有少量红细胞残留；无溶血：红细胞全部下沉，上层液体无色澄明；凝集：虽无溶血，但出现红细胞凝集，振摇后不分散 。
3.结果
3.1 肌肉刺激性实验
注射后不同时间观察结果股四头肌表面未见明显充血 ，红肿 ，家兔活动正常 ，未见明显异常反应。两只家兔48h后健康如常 ，解剖观察给药部位股四头肌刺激反应级数各为 0级 。以上试验结果提示 ，灯盏花素注射液局部肌肉无明显剌激作用。
3.2 血管刺激性实验
家兔耳缘静脉边缘滴注5d和5 d后， 左耳缘静脉与右缘静脉经肉眼观察均未见异常反应， 组织切片镜检可见耳缘静脉内皮完整、光滑、管壁未见炎症反应， 管腔内未见血柱形成。结果表明： 灯盏花素注射液局部血管未见明显刺激作用。
3.3全身主动过敏试验
A 阴性对照（0.9%氯化钠注射液）组与C灯盏花素注射液（原液）组豚鼠分别于第 1 次致敏给药后第14 d及21 d， 由上肢外侧静脉注射灯盏花素注射液或0.9%氯化钠注射液0.5 m l，注射后豚鼠均未出现明显反应 ，判定为 0级 ，提示灯盏花素注射液未见全身主动过敏反应 ； 而B阳性对照（5%卵蛋白液）组豚鼠分别于第 1次致敏给药后第14d及21d， 由上肢外侧静脉注射5%卵蛋白液0.5 ml， ，注射后豚鼠在 5 min 内均出现兴奋不安、呼吸困难、抓鼻、颤抖、竖毛、痉挛、抽搐、大小便失禁、休克死亡等過敏反应，判定为4级 。
3.4 体外溶血实验
第7管（阳性对照管）溶液呈现澄明红色，其余6管均末见澄明红色，红细胞全部下沉，上层液体无色澄明。表明灯盏花素注射液未见明显体外溶血作用。结果见表 4 。 提示灯盏花素注射液无溶血和凝集反应 。
4 讨论
药物刺激性、过敏性、溶血性是指药物制剂经眼、耳、鼻、口腔、呼吸道、关节腔、皮肤、直肠、阴道、静脉、动脉、肌肉、皮下、 静脉旁和鞘内等非口服途径给药 ，对用药局部产生的毒性 （ 如刺激性和过敏性等 ）和/或对全身产生的毒性 （ 如过敏性、溶血性等），它是临床前安全性评价的重要组成部分。药物的活性成分及其代谢物、辅料、有关物质及理化性质 （如pH值、渗透压等 ） 均有可能引起刺激性和/或过敏性和/或溶血性的发生 ，从而影响用药的安全有效性。
本次实验灯盏花素注射液对红细胞未见溶血和凝集作用；家兔静脉注射、肌肉注射给药后未见血管、肌肉刺激性；豚鼠静脉注射后第14，21d，未见全身主动过敏反应；结果提示在本实验条件下，灯盏花素注射液安全性较好 ，符合中药注射液的安全性要求。
参考文献
[1] 甄健存，陈志刚，马子静.灯盏花素注射液质量评价[J].中国药学杂志，2007，42 （14）：1118
[2] 王金芳，牟忠颜，张艳.灯盏花注射液过敏反应 2例报道[J].中国中医急症， 2006 ， 15（ 3） ： 226
[3] 邓黎宁，黄青萍，蔡乐，等.灯盏花素注射液的临床应用[J].基层中药杂志，2001，15（1）：56
[4] 林勇，李林，骆志鹏.灯盏花素注射液的临床应用及安全性分析[J]. 临床合理用药2012，5（7C）：76
[5] 刘宁，刘海涛，曲亮.静脉滴注灯盏花素注射液过敏反应1例报告[J]. 齐鲁护理杂志 2006 ，（12）1 0：1928
[6] 常虹，毛丹，彭晓武.灯盏花素注射液致慢性荨麻疹1例[J]. 中华保健医学杂志2010（12）1：31
[7] 郭菁菁，沈志华，李明祥，等. 灯盏花素注射液致过敏性休克1例[J].中国药师，2012，（15）12：1775
[8] 国家食品药品监督管理局. 中药、天然药物局部刺激性和溶血性研究技术指导原则[S].北京，2005，12：11
[9] 国家食品药品监督管理局. 中药、天然药物免疫毒性（过敏性、光变态反应）研究技术指导原则[S].北京，2005，12：13
[10] 国家药典委员会.中国药典（一部）[S].北京中国医药科技出版社，2010，附录 92