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【摘要】目的优选复方紫草油喷雾剂中紫草油的最佳提取工艺，为以后制备喷雾剂前的紫草素包合提供条件。方法：用紫外分光光度法测定紫草油中左旋紫草素含量作控制指标，利用spss11.5软件分析L9（34）正交试验优选紫草油的最佳提取方案。结果：最佳工艺为将1cm紫草段加10倍量麻油浸泡24小时后，加热，油温控制在150℃以内，45分钟，待紫草炸制焦枯，手粘即碎，趁热微孔滤膜过滤，为下一步用环糊精包合提供条件。
【关键词】紫草油；左旋紫草素；喷雾剂；正交试验
Proper technologyofextractingArnebiae oil from compound arnebiae oilspray
Laixinhua1, dingli2,songhailang3,xuxiaomei1
（laixinhua,xuxiaomei,Yuebeipeople’Hospital,guangdong Shaoguan;dingli,Academy of Foodstuffs and medicine,guangdong guangzhou;
songhailang,Yongfutang Pharmaceutical , guangdong guangzhou）
【Abstract】objective：Optinization seasame0il extractionin thebest shikoninpreparation, condition for clathrationArnebiae oil from compoundarnebiae oil spray.Methouds: ultraviolet spectrophotometry determination shikonin standardinArnebiae oil, Spss11.5software analyse L9（34）orthogonal design of preference proper technology for extracting Arnebiae oil; Result:Fromshikoninsesame oilplus eight times the zmount of extraction temperature 110℃，the extraction time ones hour for the best preparation shikonin.Wait for fry to dry up, grind with easy, filter with millipore filtration. when it hot, condition for clathrationArnebiae oil afterward.
【key words】Arnebia euchroma（royle） johnst;Shikonin;Spray;Orthogonal design
复方紫草油喷雾剂的处方由紫草、连翘、白芷、忍冬藤、虎杖、冰片等组成，其中紫草是君药。 紫草为紫草科植物紫草Lithospermum er ythrorhizonsiebet zucc.和新疆紫草Macrotomiaeuchroma （Royle）pauls的干燥根，味甘咸，性寒，归心、肝经。具有凉血、活血、解毒透疹之功效。用于血热毒盛，斑疹、麻疹不透、疮疹湿疹、水火烫伤。【1】紫草中含羟基萘醌类色素，其中以左旋紫草素含量作为指标。其有效成分具有抗病原微生物、抗炎及抗过敏、解热、抗肿瘤、保肝、止血、降血糖、镇静和影响免疫功能等作用。【2】本研究用正交试验优选包合前紫草油最佳工艺，以便制成喷雾剂。此制剂的目的是提高紫草制剂的稳定性，不会因操作污染和刺激伤口，制备简便易行，使用方便。此处方制成的喷雾剂目前尚未报道。
1材料与方法
1.1仪器与试药
电子天平：型号ESJ182-4（沈阳龙腾电子有限公司）；低温真空干燥箱：型号DZF-6021（上海精宏实验仪器有限公司）；紫外分光光度计：型号TU-1800SPC（北京普析通用仪器有限责任公司）。电热恒温水浴锅：型号HHSYZI-NI14（上杭仪器有限公司）。紫草，购于广东省韶关市阳元中药饮片有限公司，批号080801，产地新疆；连翘，同上，批号081202，河南；白芷，同上，批号080101，四川；忍冬藤，同上，批号：080501，广东。虎杖，同上，080605，广东；β-环状糊精，孟州市华兴生物化工有限责任公司，批号081017；麻油，本地农副产品商店购买，350ml装。其余试剂均为分析纯。水为纯化水。
1.2处方
紫草62.5g，虎杖62.5g，白芷62.5g,连翘62.5g,忍冬藤62.5g,冰片3.1g，β-環糊精适量，麻油适量，羟苯乙酯0.03g，共制成1000g复方紫草油喷雾剂。
1.3喷雾剂制备工艺
复方紫草油喷雾剂制备时将（除紫草外）干燥药材抢水洗三次，晾干，提前24h在适量麻油中浸润，麻油盖面高1cm，加热至180℃，恒温煎炸60min，至白芷焦黄褐色为度，趁热用3号筛和0.45μm微孔滤膜过滤，滤液50℃加入冰片、羟苯乙酯，105℃高压蒸汽灭菌30分钟，备用。将略潮软的已粉碎紫草投入适量麻油中浸润24h,再加热至一定温度提取，同法过滤，待紫草油温降至50℃用适量β-环糊精包合，低温干燥包合物，环氧乙烷灭菌，临配置前常温加入前滤液，即得。
2实验方法
2.1正交试验设计
根据制备工艺，采用四因素三水平，用L9（34）正交试验选定紫草油的最佳提取方案，提高制剂的质量[3]。同时注意煎炸紫草的油量不能太大，影响包合质量。9批样品的试验因素水平见表1。
表19批样品试验因素水平表
水平
因素 A提取时间（min） B粉碎度 C提取油量（倍） D提取温度
1
2
3 30
45
60 1cm
2cm
粗粉 6
8
10 110℃
130℃
150℃
2.2紫草油样品的制备
将抢水洗净晾干略潮软的已粉碎紫草投入适量麻油中浸润,再加热至适宜温度提取，趁热过80目筛，0.45μm微孔滤膜过滤既得。共制九份样品。
3紫草油中紫草素的含量测定
精密吸取样品液5ml，置分液漏斗中，加入1%氢氧化钠溶液振摇3次（20,20,10ml），合并碱液，加10%盐酸溶液调PH值至酸性，（PH值为3.5-5.5），用氯仿萃取4次（20、20、10、10ml），合并氯仿液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容在25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；再精密吸取5ml至25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在516nm波长处测其吸光度，用甲醇做空白，按左旋紫草素（C16H16O5）的吸收系数（E 1%1cm）为242计算，即得。
3.1重现性试验
取同一批样品，按供试品溶液制备方法处理，测量6次。依次测得样品的含量，RSD=0.625%（n=6）,表明方法重现性良好。
3.2统计学方法
用正交试验的方差分析实验结果见表2。
4试验结果
4.1方差分析实验结果见表3。
表2紫草素含量的正交试验结果（mg/%）
水平因素 A提取时间（min） B粉碎度 C提取油量（倍） D提取温度 紫草素含量（mg/100ml）
1
2
3
4
5
6
7
8
9 1
1
1
2
2
2
3
3
3 1
2
3
1
2
3
1
2
3 1
2
3
2
3
1
3
1
2 1
2
3
3
1
2
2
3
1 3.49
4.88
6.44
6.12
6.89
4.58
7.22
4.56
5.22
表3 单因素统计量表
1. A提取时间（min）
Dependent Variable: VAR00001 ：紫草素含量
时间 Mean Std. Error 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
1.00 4.937 .106 4.481 5.393
2.00 5.863 .106 5.407 6.319
3.00 5.667 .106 5.211 6.123
2. B粉碎度
Dependent Variable: VAR00001 ：紫草素含量
粉碎度 Mean Std. Error 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
1.00 5.610 . . .
2.00 5.443 . . .
3.00 5.413 . . .
3.C提取油量（倍）
Dependent Variable: VAR00001：紫草素含量
油量 Mean Std. Error 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
1.00 4.210 .106 3.754 4.666
2.00 5.407 .106 4.951 5.863
3.00 6.850 .106 6.394 7.306
4.D提取溫度。
Dependent Variable: VAR00001：紫草素含量
温度 Mean Std. Error 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
1.00 5.200 .106 4.744 5.656
2.00 5.560 .106 5.104 6.016
3.00 5.707 .106 5.251 6.163
表4 方差分析表Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable: VAR00001 ：紫草素含量
Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Corrected Model 12.390（a） 8 1.549 . .
Intercept 271.151 1 271.151 . .
A 1.430 2 .715 . .
C 10.485 2 5.242 . .
D .408 2 .204 . .
B .067 2 .034 . .
Error .000 0 .
Total 283.541 9
Corrected Total 12.390 8
aR Squared = 1.000 （Adjusted R Squared = .）
从表四结果直观分析，各因素水平对结果影响的强弱顺序为C3A2D3B1.
即最佳工艺为加10倍油量，提取45min，温度控制在不超过150℃，选取1cm长的紫草段。
表5 方差分析表Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable: VAR00001：紫草素含量
Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Corrected Model 12.323（a） 6 2.054 60.984 .016
Intercept 271.151 1 271.151 8051.336 .000
A 1.430 2 .715 21.235 .045
D .408 2 .204 6.055 .142
C 10.485 2 5.242 155.664 .006
Error .067 2 .034
Total 283.541 9
Corrected Total 12.390 8
aR Squared = .995 （Adjusted R Squared = .978）
从实验结果来看，影响最大的是C麻油的用量，其次是提取时间A，两个因素的误差P小于0.05，粉碎度B和提取温度D两项无显著差异即P大于0.05。其中有些含量偏低，可能与原料有关，本实验选的是新疆软紫草，紫草素含量最高【2】。从方差分析来看，溶济量大，有利于紫草素的溶出，但在110℃-150℃之间，温度影响不大，这与张继平【3】所选取的温度小于150℃的结果一致。反而提取时间太长不利于提取，在45min内提取最好，说明温度长时间升高对紫草素的含量有一定影响。因牵渋到包合的诸多问题，制剂要求选择提取液容积小，含量高的制备方法，试验显示最好的制备条件是将1cm紫草段加10倍量麻油浸泡24小时后，加热，油温控制在150℃以内，45分钟。待油温降至50℃时用β-环糊精包合，为最佳试验条件。提取液不必再加量至20倍进行试验。包合工艺另研究。
5讨论
复方紫草油喷雾剂中紫草是君药，紫草具有味甘咸，性寒，归心、肝经；具有凉血、活血、解毒透疹等功效，多用于烧烫伤制剂；虎杖中鞣酸的副作用较磺胺嘧啶的肝肾毒性小，能使皮肤粘膜、溃疡等部位的蛋白质凝固，而呈收敛作用；白芷有解毒、消肿、排脓作用，连翘和忍冬藤有较强清热、解毒、抗菌、消高热烦渴功效；辅以麻油的甘、凉，解毒、生肌功效，另麻油制剂在涂用时对皮肤有润滑作用和对创面有保护作用,并可消除鳞屑,还可起到止痛作用【4】；加上冰片有清热止痛,加速溃疡面愈合的作用，几种中药相辅相成，从而有较强的清心、肝、肺经热和解毒、生肌、抗菌的功效，加速治愈烧烫伤创面，减少病人的五心烦热，干渴等不适。制成喷雾剂来提高紫草制剂的稳定性，且成品较紫草油纱布便于贮藏。已制成的复方紫草油喷雾剂放置半年未见质量有变化，而紫草油纱布存放时间不超过30天，延长了有效期，减少多层纱布吸取药物造成的浪费。
喷雾能使药物粒径更小，便于吸收，不会因操作污染和刺激伤口，换药方便。且可将麻油看作一种有效成分[5]。紫草制剂在提取，制备及贮存时应防止成分结构改变或被破坏。适用于浅、深Ⅱ度烧烫伤[4]。此制剂制备简便易行，使用方便，可大量应用于临床。
参考文献
[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典2010年版一部•第一版，北京：化学工业出版社，2010，320.
[2]李晓瑾，谭秀芳，马媛.药用植物紫草的研究进展[J]；新疆师范大学学报，2005,24（4）:69-73.
[3]张继平，蔡丽云，香卫红.正交试验优选紫草油提取工艺的研究[J];中成药，2002,24（1）:10-12.
[4]郭红军，孔焕宇，张华.紫草油膏中的化学成分研究[J];时珍国医国药，2006，17（2）:153-154.
[5]谢秀琼，邱明丰.对制剂中紫草成分和提取工艺的探讨[J]；中国药房，1997,8（2）:59-60.
【关键词】紫草油；左旋紫草素；喷雾剂；正交试验
Proper technologyofextractingArnebiae oil from compound arnebiae oilspray
Laixinhua1, dingli2,songhailang3,xuxiaomei1
（laixinhua,xuxiaomei,Yuebeipeople’Hospital,guangdong Shaoguan;dingli,Academy of Foodstuffs and medicine,guangdong guangzhou;
songhailang,Yongfutang Pharmaceutical , guangdong guangzhou）
【Abstract】objective：Optinization seasame0il extractionin thebest shikoninpreparation, condition for clathrationArnebiae oil from compoundarnebiae oil spray.Methouds: ultraviolet spectrophotometry determination shikonin standardinArnebiae oil, Spss11.5software analyse L9（34）orthogonal design of preference proper technology for extracting Arnebiae oil; Result:Fromshikoninsesame oilplus eight times the zmount of extraction temperature 110℃，the extraction time ones hour for the best preparation shikonin.Wait for fry to dry up, grind with easy, filter with millipore filtration. when it hot, condition for clathrationArnebiae oil afterward.
【key words】Arnebia euchroma（royle） johnst;Shikonin;Spray;Orthogonal design
复方紫草油喷雾剂的处方由紫草、连翘、白芷、忍冬藤、虎杖、冰片等组成，其中紫草是君药。 紫草为紫草科植物紫草Lithospermum er ythrorhizonsiebet zucc.和新疆紫草Macrotomiaeuchroma （Royle）pauls的干燥根，味甘咸，性寒，归心、肝经。具有凉血、活血、解毒透疹之功效。用于血热毒盛，斑疹、麻疹不透、疮疹湿疹、水火烫伤。【1】紫草中含羟基萘醌类色素，其中以左旋紫草素含量作为指标。其有效成分具有抗病原微生物、抗炎及抗过敏、解热、抗肿瘤、保肝、止血、降血糖、镇静和影响免疫功能等作用。【2】本研究用正交试验优选包合前紫草油最佳工艺，以便制成喷雾剂。此制剂的目的是提高紫草制剂的稳定性，不会因操作污染和刺激伤口，制备简便易行，使用方便。此处方制成的喷雾剂目前尚未报道。
1材料与方法
1.1仪器与试药
电子天平：型号ESJ182-4（沈阳龙腾电子有限公司）；低温真空干燥箱：型号DZF-6021（上海精宏实验仪器有限公司）；紫外分光光度计：型号TU-1800SPC（北京普析通用仪器有限责任公司）。电热恒温水浴锅：型号HHSYZI-NI14（上杭仪器有限公司）。紫草，购于广东省韶关市阳元中药饮片有限公司，批号080801，产地新疆；连翘，同上，批号081202，河南；白芷，同上，批号080101，四川；忍冬藤，同上，批号：080501，广东。虎杖，同上，080605，广东；β-环状糊精，孟州市华兴生物化工有限责任公司，批号081017；麻油，本地农副产品商店购买，350ml装。其余试剂均为分析纯。水为纯化水。
1.2处方
紫草62.5g，虎杖62.5g，白芷62.5g,连翘62.5g,忍冬藤62.5g,冰片3.1g，β-環糊精适量，麻油适量，羟苯乙酯0.03g，共制成1000g复方紫草油喷雾剂。
1.3喷雾剂制备工艺
复方紫草油喷雾剂制备时将（除紫草外）干燥药材抢水洗三次，晾干，提前24h在适量麻油中浸润，麻油盖面高1cm，加热至180℃，恒温煎炸60min，至白芷焦黄褐色为度，趁热用3号筛和0.45μm微孔滤膜过滤，滤液50℃加入冰片、羟苯乙酯，105℃高压蒸汽灭菌30分钟，备用。将略潮软的已粉碎紫草投入适量麻油中浸润24h,再加热至一定温度提取，同法过滤，待紫草油温降至50℃用适量β-环糊精包合，低温干燥包合物，环氧乙烷灭菌，临配置前常温加入前滤液，即得。
2实验方法
2.1正交试验设计
根据制备工艺，采用四因素三水平，用L9（34）正交试验选定紫草油的最佳提取方案，提高制剂的质量[3]。同时注意煎炸紫草的油量不能太大，影响包合质量。9批样品的试验因素水平见表1。
表19批样品试验因素水平表
水平
因素 A提取时间（min） B粉碎度 C提取油量（倍） D提取温度
1
2
3 30
45
60 1cm
2cm
粗粉 6
8
10 110℃
130℃
150℃
2.2紫草油样品的制备
将抢水洗净晾干略潮软的已粉碎紫草投入适量麻油中浸润,再加热至适宜温度提取，趁热过80目筛，0.45μm微孔滤膜过滤既得。共制九份样品。
3紫草油中紫草素的含量测定
精密吸取样品液5ml，置分液漏斗中，加入1%氢氧化钠溶液振摇3次（20,20,10ml），合并碱液，加10%盐酸溶液调PH值至酸性，（PH值为3.5-5.5），用氯仿萃取4次（20、20、10、10ml），合并氯仿液，水浴蒸干，残渣用甲醇溶解并定容在25ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀；再精密吸取5ml至25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，照紫外-可见分光光度法，在516nm波长处测其吸光度，用甲醇做空白，按左旋紫草素（C16H16O5）的吸收系数（E 1%1cm）为242计算，即得。
3.1重现性试验
取同一批样品，按供试品溶液制备方法处理，测量6次。依次测得样品的含量，RSD=0.625%（n=6）,表明方法重现性良好。
3.2统计学方法
用正交试验的方差分析实验结果见表2。
4试验结果
4.1方差分析实验结果见表3。
表2紫草素含量的正交试验结果（mg/%）
水平因素 A提取时间（min） B粉碎度 C提取油量（倍） D提取温度 紫草素含量（mg/100ml）
1
2
3
4
5
6
7
8
9 1
1
1
2
2
2
3
3
3 1
2
3
1
2
3
1
2
3 1
2
3
2
3
1
3
1
2 1
2
3
3
1
2
2
3
1 3.49
4.88
6.44
6.12
6.89
4.58
7.22
4.56
5.22
表3 单因素统计量表
1. A提取时间（min）
Dependent Variable: VAR00001 ：紫草素含量
时间 Mean Std. Error 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
1.00 4.937 .106 4.481 5.393
2.00 5.863 .106 5.407 6.319
3.00 5.667 .106 5.211 6.123
2. B粉碎度
Dependent Variable: VAR00001 ：紫草素含量
粉碎度 Mean Std. Error 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
1.00 5.610 . . .
2.00 5.443 . . .
3.00 5.413 . . .
3.C提取油量（倍）
Dependent Variable: VAR00001：紫草素含量
油量 Mean Std. Error 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
1.00 4.210 .106 3.754 4.666
2.00 5.407 .106 4.951 5.863
3.00 6.850 .106 6.394 7.306
4.D提取溫度。
Dependent Variable: VAR00001：紫草素含量
温度 Mean Std. Error 95% Confidence Interval
Lower Bound Upper Bound
1.00 5.200 .106 4.744 5.656
2.00 5.560 .106 5.104 6.016
3.00 5.707 .106 5.251 6.163
表4 方差分析表Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable: VAR00001 ：紫草素含量
Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Corrected Model 12.390（a） 8 1.549 . .
Intercept 271.151 1 271.151 . .
A 1.430 2 .715 . .
C 10.485 2 5.242 . .
D .408 2 .204 . .
B .067 2 .034 . .
Error .000 0 .
Total 283.541 9
Corrected Total 12.390 8
aR Squared = 1.000 （Adjusted R Squared = .）
从表四结果直观分析，各因素水平对结果影响的强弱顺序为C3A2D3B1.
即最佳工艺为加10倍油量，提取45min，温度控制在不超过150℃，选取1cm长的紫草段。
表5 方差分析表Tests of Between-Subjects Effects
Dependent Variable: VAR00001：紫草素含量
Source Type III Sum of Squares df Mean Square F Sig.
Corrected Model 12.323（a） 6 2.054 60.984 .016
Intercept 271.151 1 271.151 8051.336 .000
A 1.430 2 .715 21.235 .045
D .408 2 .204 6.055 .142
C 10.485 2 5.242 155.664 .006
Error .067 2 .034
Total 283.541 9
Corrected Total 12.390 8
aR Squared = .995 （Adjusted R Squared = .978）
从实验结果来看，影响最大的是C麻油的用量，其次是提取时间A，两个因素的误差P小于0.05，粉碎度B和提取温度D两项无显著差异即P大于0.05。其中有些含量偏低，可能与原料有关，本实验选的是新疆软紫草，紫草素含量最高【2】。从方差分析来看，溶济量大，有利于紫草素的溶出，但在110℃-150℃之间，温度影响不大，这与张继平【3】所选取的温度小于150℃的结果一致。反而提取时间太长不利于提取，在45min内提取最好，说明温度长时间升高对紫草素的含量有一定影响。因牵渋到包合的诸多问题，制剂要求选择提取液容积小，含量高的制备方法，试验显示最好的制备条件是将1cm紫草段加10倍量麻油浸泡24小时后，加热，油温控制在150℃以内，45分钟。待油温降至50℃时用β-环糊精包合，为最佳试验条件。提取液不必再加量至20倍进行试验。包合工艺另研究。
5讨论
复方紫草油喷雾剂中紫草是君药，紫草具有味甘咸，性寒，归心、肝经；具有凉血、活血、解毒透疹等功效，多用于烧烫伤制剂；虎杖中鞣酸的副作用较磺胺嘧啶的肝肾毒性小，能使皮肤粘膜、溃疡等部位的蛋白质凝固，而呈收敛作用；白芷有解毒、消肿、排脓作用，连翘和忍冬藤有较强清热、解毒、抗菌、消高热烦渴功效；辅以麻油的甘、凉，解毒、生肌功效，另麻油制剂在涂用时对皮肤有润滑作用和对创面有保护作用,并可消除鳞屑,还可起到止痛作用【4】；加上冰片有清热止痛,加速溃疡面愈合的作用，几种中药相辅相成，从而有较强的清心、肝、肺经热和解毒、生肌、抗菌的功效，加速治愈烧烫伤创面，减少病人的五心烦热，干渴等不适。制成喷雾剂来提高紫草制剂的稳定性，且成品较紫草油纱布便于贮藏。已制成的复方紫草油喷雾剂放置半年未见质量有变化，而紫草油纱布存放时间不超过30天，延长了有效期，减少多层纱布吸取药物造成的浪费。
喷雾能使药物粒径更小，便于吸收，不会因操作污染和刺激伤口，换药方便。且可将麻油看作一种有效成分[5]。紫草制剂在提取，制备及贮存时应防止成分结构改变或被破坏。适用于浅、深Ⅱ度烧烫伤[4]。此制剂制备简便易行，使用方便，可大量应用于临床。
参考文献
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